Colloque

Localisation de promoteurs par immunoprécipitation de complexes entre l'ARN polymérase et des fragments de restriction d'ADN

Guy Bellemare

Anne-Catherine Hatton

Claude Lemieux

Membre a labase

Guy Bellemare

Résumé du colloque

Nous avons mis au point une technique d'immunoprécipitation sélective de fragments d'ADN possédant un ou plusieurs promoteurs de nature procaryotique. L'ARN-polymérase ADN-dépendante de E. coli est incubée avec des fragments de restriction d'ADN dans un milieu réactionnel favorable à la formation de complexes ADN-ARN polymérase. Ces complexes sont ensuite immunoprécipités à l'aide d'un anticorps polyclonal spécifique dirigé contre l'ARN polymérase en présence de protéine A liée à des billes de Sepharose. Des lavages successifs des immunoprécipités permettent d'éliminer les fragments de restriction qui n'ont pas fixé la polymérase. Les fragments d'ADN engagés dans ces complexes sont finalement libérés par ébullition avec un tampon contenant du SDS et identifiés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide ou d'agarose. Cette technique d'immunoprécipitation a été testée sur des fragments de restriction d'un plasmide recombinant contenant les gènes chloroplastiques des sous-unités B et de l'ATPase et l'épinard. La séquence d'ADN de ce plasmide nous indique que seuls les fragments de restriction contenant un promoteur ont été immunoprécipités.

Contexte

Section :

Biochimie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biochimie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université du Québec à Chicoutimi

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Titre du colloque :

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