Colloque

Mécanisme du ciblage spécifique de la protéine K-ras4B à la membrane plasmique dans les cellules de mammifères

Marie-Odile Roy

John R. Silvius

Membre a labase

Marie-Odile Roy

Résumé du colloque

Les fonctions physiologiques ainsi qu'oncogéniques des protéines ras reposent sur le ciblage de ces dernières vers la membrane plasmique des cellules de mammifères. Le ciblage de la protéine K-ras4B vers la membrane plasmique est dirigé par l'extrémité carboxyle de la protéine qui comprend la séquence -SKDGKKKKKKSKTKC(farnésyle)-OMe (résidus d'acides aminés 171 à 185). Afin de mieux élucider le mécanisme du ciblage de cette séquence, nous avons construit des protéines de fusion en liant la protéine fluorescente EGFP, soit à la séquence C-terminale de la protéine K-ras4B, soit à des formes variantes de cette séquence. Lorqu'elle est exprimée par transfection dans les cellules fibroblastiques CV-1, la protéine chimère EGFP/K-ras4B(171-185) est dirigée spécifiquement vers la membrane plasmique, comme cela a déjà été démontré pour d'autres protéines de fusion incorporant cette même séquence de la protéine K-ras4B. La fidélité du ciblage est préservée lorsque le groupement farnésyle est remplacé par un autre résidu hydrophobe, c'est-à-dire par une chaîne géranylgéranyle ou myristoyle, ou bien après le remplacement de la séquence cibleuse par la séquence <> -AAAGKKKKKKAQAQC(farnésyle)-OMe. D'autres expériences de mutagénèse indiquent que la spécificité du ciblage vers la membrane plasmique dépend du nombre et non de la position des résidus lysine dans la séquence cibleuse. Ces résultats suggèrent que la fonction cibleuse de cette séquence repose plus sur le caractère polybasique et amphiphile de celle-ci, plutôt que sur une reconnaissance spécifique par un hypothétique récepteur protéique.