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Méthode d’analyse des dommages à l’ADN et de leur réparation

Jean Legault
M. E. Mirault
Alain Tremblay
Dindial Ramotar
JL

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Jean Legault

Résumé du colloque

La production d’oxygène actif et de radicaux libres par des processus endogènes (par ex. inflammatoires) ou des facteurs environnementaux (radiations, xénobiotiques) a été impliquée comme une des causes potentielles de dommages à l’ADN et de cancer. Une procédure basée sur un marquage des extrémités terminales 3’-OH de l’ADN a été développée pour faciliter l’analyse des dommages à l’ADN et de leur réparation. L’endonucléase IV de E. coli, une enzyme qui a une activité de réparation 3’-diestérase, a été utilisée pour exciser les groupes bloquants-3’ (ex. 3’-phosphates, 3’-phosphoglycolates) et hydrolyser les sites apuriniques/apyrimidiniques pour régénérer des extrémités 3’-hydroxyl qui sont requises pour l’activité T4 ADN polymérase. De plus, un traitement avec la nucléase S1, dans des conditions appropriées, a permis d’amplifier la détection des scissions simple brin d’ADN. Nos résultats indiquent 1) que l’ADN isolé de cellules cultivées dans des conditions standard contient un taux important d’extrémités 3’-OH (~2x108 dC échangé par ng ADN) qui résultent probablement des processus biosynthétiques et métaboliques normaux de l’ADN (ex. réplication, réparation, transcription); 2) que cette technique permet d’analyser des dommages induits par les rayons-g, des oxydants classiques (ménadione), des agents alkylants (MMS) et des inhibiteurs de topoisomérase II (streptonigrine, VM-26); 3) que ces scissions n’apparaissent pas être induites au hasard dans le génome, mais plutôt dans de courtes régions de l’ADN; 4) que cette procédure peut être utilisée pour mesurer des dommages à l’ADN de tissus induits in vivo dans la souris (ex. foie, rein); 5) que le marquage des extrémités 3’-OH d’ADN, combiné à l’utilisation de l’endonucléase IV ou S1, est particulièrement puissant pour suivre la réparation des dommages à l’ADN dans des cellules exposées à des agents clastogéniques.

Contexte

Section :
La recherche en santé environnementale au Québec
news icon Thème du colloque :
La recherche en santé environnementale au Québec
host icon Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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