Colloque

Méthode rapide de micro-enrichissement de protéines nucléaires

René Roy

Sylvain L. Guerin

Pierre Gosselin

Membre a labase

René Roy

Résumé du colloque

On ne peut trouver dans la littérature, de procédures nous permettant de préparer dans une période de temps raisonnable des extraits nucléaires provenant de tissus animaux. L'unique méthode efficace consiste à séparer par ultracentrifugation les noyaux sur coussins de sucrose. Cependant, cette procédure est longue et fastidieuse et comporte des étapes de purification coûteuses. De plus, une telle procédure n'est pas appropriée pour la préparation d'échantillons à partir de tissus non abondants tel que les surrénales ou la prostate. Nous décrivons ici, une nouvelle micro-méthode simple et efficace pour préparer rapidement des extraits nucléaires provenant de tissus animaux ou de cellules en culture. Cette procédure comporte un enrichissement des protéines liant l'ADN et présentes dans ces extraits à l'aide d'une résine d'affinité: l'héparine sépharose CL-6B. Les extraits nucléaires ainsi enrichis, se sont avérés être de bonne qualité, ceux-ci nous permettant de réaliser des études d'interactions ADN-protéines tel que la rétention en gel et polyacrylamide et la cartographie à la DNaseI ou au DMS. Le procédé est d'autant plus attrayant qu'il peut être réalisé à un coût minime en moins de 4 heures, et avec aussi peu que 1 g de tissus frais.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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