Colloque

Méthode rapide pour faire l'électrophorèse d'ARN polyadénylé à partir de quelques microgrammes d'ARN total

Vasek A. Mezl

Wolfgang Dillmann

Membre a labase

Vasek A. Mezl

Résumé du colloque

Pour faire une analyse Northern de l'ARN polyadénylé de cœur de rat, 5 à 25 µg d'ARN total sont placés dans un tube Eppendorf contenant du NaCl 0.5M et de l'oligo(dT)-cellulose (1-2 µg/50 µL). La capillarité permet d'inverser le tube pour maintenir la résine en suspension et obtenir l'attachement de l'ARN. L'ARN non retenu et les solutions de lavage sont enlevés après centrifugation à basse vitesse. L'élution et l'adénilation de l'ARN se font en chauffant la résine avec le tampon d'électrophorèse; on utilise le surnageant pour l'électrophorèse sur gel formaldéhyde. Après transfert sur nylon, on a utilisé l'hybridation avec des plasmides marqués pour les diverses sondes, comme la chaîne lourde de la myosine, protéines ribosomales S14 et L32. L'analyse de l'hybridation a donné une intensité de 70%. Cette méthode rapide (24 échantillons dans un avant-midi) devrait avantager les autres usines dénaturants.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université d’Ottawa

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Titre du colloque :

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