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Mise au point de la méthode signature-tagged-mutagenesis (STM)

Julien St-Jean
Marc Sirois
Luc Gagnon
JS

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Julien St-Jean

Résumé de la communication

La bactérie Actinobacillus pleuropneumoniae (Apl) cause de nombreuses épidémies de pleuropneumonie (une infection respiratoire très contagieuse) chez le porc au Québec, mais aussi ailleurs dans le monde. On sait maintenant que les facteurs de virulence dont l'expression s'opère exclusivement in vivo sont théoriquement impossibles à isoler par les méthodes conventionnelles de génétique moléculaire puisque celles-ci ne permettent que la sélection et l'expression in vitro. Pour pallier à cet impondérable, nous avons alors décidé d'utiliser une méthode particulière nommée STM ou "signature-tagged mutagenesis". STM fait appel à un transposon (mutagenèse insertionnelle) marqué d'une séquence-oligo unique de 21 paires de bases afin d'inactiver des gènes essentiels à la croissance bactérienne dans l'hôte. Au total, 12 vecteurs (de type "pLOF/Km mini-tn10") contenant chacun un transposon différent ont été construits. Lors d'une mutagenèse mettant en contact un transposon marqué et la bactérie étudiée (Apl), le transposon s'insère dans le génome bactérien de façon aléatoire et inactive ainsi un gène donné. Les mutants sont finalement soumis à une ronde de criblage lors de l'infection des souris. Cette technologie fonctionne par sélection négative car elle permet de mettre en évidence (d'une façon indirecte) des mutants qui ne peuvent croître in vivo (dans la souris) et qui possèdent donc un gène essentiel inactivé par l'insertion d'un transposon. Chaque mutant est marqué par une séquence-oligo qui permet de retracer les bactéries d'intérêt par PCR après l'infection des souris. Avec STM, il est ainsi possible d'isoler et d'étudier plus en profondeur des gènes qui sont essentiels à la survie d'Apl dans un modèle animal qui se rapproche sensiblement du porc.

Contexte

Section :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Thème du communication :

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