Colloque

Mise au point de tests de liaison en conditions physiologiques entre l'apolipoprotéine D et ses différents ligands hydrophobes

Karine Marcoux-Legault

Éric Rassart

Pierre Rigolli

Louise Brissette

Membre a labase

Karine Marcoux-Legault

Résumé du colloque

L'apolipoprotéine D (apoD) fait partie de la famille des lipocalines dont la principale fonction est le transport de molécules hydrophobes. Plusieurs tests de liaison ont été effectués jusqu'à maintenant et ont identifié le cholestérol, la bilirubine, la progestérone, la prégnénolone et l'acide arachidonique comme étant des ligands potentiels pour l'apoD. Cependant, à cause de l'hydrophobicité de ces ligands, aucun de ces tests de liaison n'ont reproduit un environnement physiologique. Le présent projet avait comme objectif la mise au point d'un test de liaison représentant des conditions physiologiques et permettant l'identification des principaux ligands de cette protéine afin d'acquérir de plus amples indices sur sa ou ses fonctions qui sont présentement mal définies. À cause de leur hydrophobicité, un présentateur des ligands à la protéine doit être employé afin de solubiliser ces ligands. La première approche a utilisé les liposomes comme présentateurs. Cette technique a permis d'identifier le cholestérol comme étant un ligand de faible affinité avec un ratio molaire de liaison protéine/ligand de 1:0,15. Cependant, à cause de la faible incorporation de la progestérone, de la prégnénolone et de l'acide arachidonique dans les liposomes, un deuxième test de liaison a été mis au point. Cette deuxième approche est basée sur le principe de l'immunoprécipitation en utilisant un mélange de quatre anticorps monoclonaux anti-apoD, soit D4, D6, D7 et D8. L'albumine sérine humaine démontre une bonne association avec les quatre ligands et est, jusqu'à maintenant, le meilleur présentateur de ligands pour ce test de liaison. Ces tests de liaison serviront également à identifier le site de liaison de l'apoD avec ses ligands. Pour se faire, la protéine, dont certains acides aminés susceptibles d'intéragir dans la liaison ont été mutés, sera mise dans les tests et l'affinité pour les différents ligands sera comparée avec celle de l'apoD sauvage. Sachant que l'apoD est exprimée dans plusieurs organes chez plusieurs espèces, mais que son ou ses rôles sont inconnus, ces deux tests de liaison permettront d'identifier l'affinité réelle de l'apoD pour ses ligands en conditions physiologiques et de cibler plus précisément son ou ses implications biologiques.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université de Trois-Rivières

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Titre du colloque :

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