Colloque

Modèle d'hépatocytes en culture pour les études de toxicité chronique

L. Bacha

F. Denizeau

M. Marioré

Membre a labase

L. Bacha

Résumé du colloque

Le but du présent projet est d'étendre l'utilité du modèle d'hépatocytes en culture primaire à l'étude des effets à long terme des toxiques, en particulier les promoteurs de la cancérogenèse. Pour ce faire, il est nécessaire d'optimiser les conditions de culture (substrat, facteurs spécifiques) ainsi que d'identifier les stimuli de réplication cellulaire les plus puissants. Par la mesure de l'ADN total en cours de culture (fluorescence avec le Hoechst 33258), nous avons évalué différentes combinaisons de substrats (plastique, collagène I et Matrigel) et de milieux de culture (L-15, MEM+1% FBS, L-15 + 25% DMSO). La combinaison L-15 + Matrigel semble la meilleure, permettant de conserver les cultures de 6 à 8 semaines. Le suivi par histochimie de la GGT montre que l'induction de cette enzyme par le cortisol n'est pas affectée par la nature du substrat, mais est réduite en présence d'inhibiteurs de la différentiation en cours. Nous avons étudié par étude cinétique du stimuli de la réplication cellulaire ou par la mesure de l'incorporation de thymidine tritiée dans l'ADN. La meilleure réponse (plus de 30 fois la valeur témoin) a été obtenue en combinant l'insuline, l'EGF (10 ng/ml) et 0.1% de sérum de rat hépatocytes. Paradoxalement, un stimuli cancérigène dans d'autres systèmes, utilisant l'EGF (40 ng/ml) et une faible concentration d'insuline (0.4 mM vs 1.6) a donné une faible réponse. Cela pourrait être attribué à la nature du milieu nutritif (L-15 vs MEM). Nous poursuivons l'optimisation de ce modèle qui, ultimement, pourrait être employé dans des essais de transformation cellulaire permettant le suivi de l'apparition de certains marqueurs tumoraux.

Contexte

Section :

Pharmacologie/Toxicologie

Thème du colloque :

Pharmacologie/Toxicologie

Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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