Colloque

Mutagénèse du RNA 16S d'Escherichia coli dans le site de liaison de la streptomycine

Daniel Leclerc

Michel Gravel

Pierre Melançon

Lea Brakier-Gingras

Membre a labase

Daniel Leclerc

Résumé du colloque

Nous avons montré précédemment que la streptomycine (Sm) se lie au RNA 16S de la sous-unité ribosomique 30S d'E. coli, dans la région des bases 892 à 917. Nous avons introduit des délétions dans cette région en utilisant un plasmide construit dans notre laboratoire, pPM112, qui contient le gène codant pour le RNA 16S, directement sous le promoteur pour le phage T7. Les délétions ont été produites dans pPM112 par mutagénèse dirigée à l'aide d'un oligonucleotide synthétique en utilisant le système du phage M13. Nous avons construit 2 plasmides mutés, pMAG10 et pMAG23, qui ont respectivement amputés des bases 896 à 904 et 889 à 911 du RNA 16S. Ces plasmides ont été transcrits in vitro et les RNA 16S ainsi obtenus ont été réassociés aux protéines ribosomiques pour former des sous-unités 30S mutées, qui conjuguent avec des sous-unités 50S reconstituées avec un RNA 16S intact lors d'une centrifugation au travers d'un gradient de saccharose. L'activité de synthèse et la précision de la lecture du message des sous-unités 30S mutées ont été évaluées sous la direction du poly(U), en l'absence ou la présence de Sm. Les résultats obtenus démontrent l'importance de la région du RNA 16S spécifiquement modifiée dans le fonctionnement du ribosome et dans le contrôle de sa réponse à Sm.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université de Moncton

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Titre du colloque :

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