Colloque

Nouvelle méthode HPLC pour l'étude du profil des métabolites de l'acide arachidonique dans diverses préparations biologiques

Pierre Borgeat

Serge Picard

Michel Lavolette

Jacques Hebert

Membre a labase

Pierre Borgeat

Résumé du colloque

Nous avons récemment mis au point un procédé d'analyse basé sur la chromatographie en phase liquide à haute performance (phase inverse) pour l'étude du métabolisme de l'acide arachidonique. Ce procédé se distingue par le fait que l'échantillon biologique dénaturé par addition d'un volume égal de méthanol est injecté directement sur la colonne (Radial Pak C18, 8 x 100 mm, particules de 10 µm, Waters Ass.) sans manipulation préliminaire ou qu'une centrifugation pour séparer le matériel précipité et l'acidification avec l'acide phosphorique. Le procédé n'implique donc aucune étape d'extraction, dérivation ni même d'évaporation, éliminant ainsi les sources de perte d'altération chimique de l'échantillon. L'addition d'un étalon interne permet l'analyse quantitative des différents métabolites. Grâce à l'utilisation de produits tritiés à haute activité spécifique nous avons pu déterminer que la récupération des leucotriènes C4 et B4 est supérieure à 90% pour des quantités totales injectées de l'ordre de 25 à 40 pg. L'élution des différents produits est suivie par photométrie UV et par détection de la radioactivité; la sensibilité est de 2-5 ng par substance. Cette technique nous a permis de déterminer le profil des métabolites de l'acide arachidonique dans les suspensions de leucocytes, dans des perfusats de poumons de cobaye et dans les homogénats de tissus divers.

Contexte

Section :

Pharmacologie et toxicologie

Thème du colloque :

Pharmacologie et toxicologie

Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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