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Observation directe de l'hydrolyse de couches mono-moléculaires de phospholipides par la phospholipase A2

Michel Grandbois
Christian Salesse
MG

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Michel Grandbois

Résumé du colloque

La phospholipase A2 est une enzyme qui hydrolyse la chaîne grasse en position 2 des phospholipides. Ce processus peut être visualisé directement en utilisant la microscopie de fluorescence à l'interface air-eau. Il s'agit de marquer l'enzyme avec de la fluorescéine isothiocyanate et la monocouche de phospholipides avec une sonde fluorescente, i.e. un phospholipide dont la sulforhodamine est liée de façon covalente au niveau de la tête polaire. En changeant les filtres du microscope, on peut donc observer alternativement l'enzyme ou la monocouche de phospholipides. De plus, en utilisant un phospholipide saturé, il est possible de provoquer la formation de domaines où l'on peut observer directement l'hydrolyse par la phospholipase A2 soluble du Naja naja. Après un certain temps d'hydrolyse, l'enzyme forme elle-même des domaines au même endroit où les produits d'hydrolyse ont fait une séparation de phase. Cette méthode a ensuite été utilisée pour étudier d'autres phospholipases. Celles-ci sont, par contre, des protéines périphériques, i.e. qu'elles sont partiellement incorporées dans la membrane.

Contexte

Section :
Biophysique
news icon Thème du colloque :
Biophysique
host icon Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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