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Opsonisation et phagocytose : mise en évidence en double fluorescence

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Noëlla Deslauriers

Résumé du colloque

Nous avons mis au point un test en double fluorescence permettant de visualiser en séquence l'adhérence puis l'ingestion de particules opsonisées. Des billes fluorescentes activées de 1 um de diamètre (Covaspheres®), portant préalablement enrobées d'Ig de souris, puis incubées avec des macrophages murins (lignée P388D) cultivés sur des lamelles de verre. Les macrophages sont ensuite colorés au bleu d'Evans fournissant ainsi une contrecoloration rouge des cellules à 495 nM. On a pu ainsi mettre en évidence que (1) l'adhérence des particules aux macrophages a lieu en 10-20 minutes, celles-ci étant ingérées en 40-60 minutes; (2) que le phénomène n'a lieu de façon significative que si les particules sont opsonisées par les Ig et (3) que l'activation préalable des cellules, par le LPS par ex., augmente l'ampleur et accélère la cinétique du phénomène. La méthode présente plusieurs avantages, dont la véracité: enrobage rapide et efficace des particules et l'aire de protéines spécifique pour l'étude des récepteurs, et la précision: visualisation et décompte rapides et objectifs à la fois de particules adhérées ou ingérées et des cellules impliquées.

Contexte

host icon Hôte : Université du Québec à Chicoutimi

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