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Optimisation d'une technique de dosage des métabolites énergétiques de tissus cardiaque par isotoachophorèse

Chantal Rochette
Jean-Lucien Roulau
François Péronnet
Pierre Jr. Paradis
CR

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Chantal Rochette

Résumé du colloque

Cette technique permet de doser plusieurs métabolites énergétiques (ATP, ADP, AMP, Pi, NADH, NAD, CP, lactate, IMP, pyruvate, glucose-6-phosphate) avec une limite de résolution de 0.38 µmoles/g de tissus humides. Les conditions expérimentales actuelles nécessitent 24 heures d'extraction et un changement de courant en cours d'analyse. Nous avons modifié le protocole d'analyse pour qu'il soit rapide et plus reproductible. Les conditions expérimentales modifiées pour l'extraction des métabolites : les tissus sont homogénéisés à l'aide d'un polytron dans 15 volumes d'éthanol absolu à -20°C, puis l'homogénat est amené à 50 volumes avec de l'eau contenant 1 mM d'iodure de sodium (présence d'antioxydant). L'homogénat est centrifugé à 4°C pendant 2 minutes. 2) Solutions stock : 0.5 M HCl, 10 mM Balamine et 1% méthylcellulose, HCl, 3.5% - 5 M acide n-caproïque, pH 4.35. 3) Séparation : 10 µl échantillon, 75 µA, 150°C. Grâce à ces modifications, le dosage des métabolites est passé de 24 heures à 5 minutes et la séparation ne nécessite plus un changement de courant en cours d'analyse.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université d’Ottawa

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Titre du colloque :

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