Colloque

Phosphatase alcaline intestinale

André Lebrun

Ludovic Ouellet

Membre a labase

André Lebrun

Résumé du colloque

Après purification de la phosphatase alcaline intestinale du veau, le poids moléculaire de l'enzyme a été déterminé à l'aide des constantes de sédimentation et de diffusion. La constante de sédimentation de 4.0 x 10^-13 sec et la constante de diffusion de 3.83 x 10^-7 cm²/sec ont permis de calculer une masse moléculaire de 94,000 ± 9,000. Une étude de dénaturation thermique à 55.6°C et 58.2°C a montré que l'enzyme possédait un maximum de stabilité aux environs de pH 6 qui est lui-même au voisinage du point isoélectrique. Des calculs d'enthalpie et d'entropie d'activation en fonction du pH ont montré dans chaque cas des valeurs maxima à pH 8.2. Une étude de l'influence du tampon et du magnésium a été produite. Ce qui a permis de constater qu'aucun d'eux ne faisait varier de plus de 5%, soit la vitesse maximale d'hydrolyse, soit la constante de Michaelis. Quant au zinc, il a un effet nettement inhibiteur. Par contre, les solutions d'enzyme sont très stables si elles sont gardées à un pH légèrement alcalin et dans une solution de chlorure de magnésium de concentration variant de 10^-3 M à 10^-5 M. Une observation a été faite montrant que la vitesse de la réaction en fonction de la concentration de substrat ne suivait pas la loi de Michaelis à des pH inférieurs à 8.5 environ et à basse force ionique. Certains essais ont permis d'expliquer le phénomène en suggérant la présence de deux centres actifs par molécule d'enzyme tout en excluant la possibilité de la présence de deux enzymes.