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Préparation de noyaux de cellules prostatiques canines et leur utilisation dans l'étude de l'expression androgéno-dépendante du gène de l'arginine estérase

Eric Gauthier
Roland R. Tremblay
Pierre Chapdelaine
Jean Y. Dubé
EG

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Eric Gauthier

Résumé du colloque

L'arginine estérase de la prostate canine est sécrétée sous l'influence des androgènes; l'ARN messager (ARN m) qui code pour la protéine connaît également des variations reliées au status androgénique de l'animal. Afin de mieux cerner l'effet des androgènes sur le taux transcriptionnel du gène de l'arginine estérase, nous avons développé une technique de préparation de noyaux de cellules prostatiques canines. Ces noyaux sont capables d'effectuer la transcription d'un gène in vitro. Notre procédure implique l'homogénéisation du tissu dans du sucrose 0,25 M (contenant 50 mM de Tris-HCl pH 7,5 et 5 mM de Mg SO4), un lavage au triton X-100 0,1%, ainsi qu'une ultracentrifugation sur un coussin de sucrose de 1,8 M. L'activité transcriptionnelle des noyaux fut testée dans un essai de "run-on", dans lequel les effets de la ARNase IA et de l'o-amanitine ont confirmé qu'une activité de transcription dépendante de l'ARN polymérase II est conservée dans les noyaux isolés. Finalement, des essais d'hybridation de type "dot-blot", dans lesquels des ARN transcrits in vitro étaient utilisés comme sondes, ont démontré qu'il est possible de détecter spécifiquement les transcrits de l'arginine estérase synthétisés lors d'un "run-on". Grâce à cette méthodologie, nous pouvons aborder l'étude des mécanismes moléculaires de la modulation du gène de l'arginine estérase par les androgènes.

Contexte

Section :
Endocrinologie
news icon Thème du colloque :
Endocrinologie
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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