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Préparation de tRNA et d'aminoacyl-tRNA synthétases en utilisant des colonnes de DEAE-cellulose

A.D. Bharucha
M.R.V. Murthy
R. Charbonneau
AB

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A.D. Bharucha

Résumé du colloque

La chromatographie sur DEAE-cellulose est largement utilisée soit pour la préparation d'amino-acyl-tRNA synthétases soit pour récupérer le tRNA à partir de petits milieux réactionnels. L'isolement simultané des deux espèces macromoléculaires est compliqué étant donné les quantités plus élevées de synthétases par rapport au tRNA. Nous avons mis au point un procédé pour l'isolement et la purification du tRNA et des synthétases à partir d'un même extrait. Des extraits de levures contenant environ 15,000 µg, provenant de deux colonnes de DEAE-cellulose. La première colonne est nettoyée par un traitement avec du tRNA de levure en excès, en utilisant une faible concentration en MgCl. L'élution est effectuée avec un gradient linéaire de NaCl. L'activité enzymatique des fractions est déterminée par l'acide hydroxamique. Le tRNA est récupéré à partir de fractions contenant 0.25M de NaCl. Ce procédé permet la préparation d'un tRNA de haute qualité à partir du même extrait, et en utilisant une quantité d'extrait relativement faible.

Contexte

Section :
Biochimie, biologie cellulaire et moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Moncton

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Titre du colloque :

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