Colloque

Purification de deux DNases isolées de cellules HL-60

Lucie Grise-Miron

Jean-Marie Leclerc

Membre a labase

Lucie Grise-Miron

Résumé du colloque

Les DNases sont des enzymes qui sont impliquées dans le maintien de l'intégrité du DNA. Nous avons étudié ces enzymes à partir de cellules promyélocytaires leucémiques humaines HL-60 en culture. Nous avons isolé deux activités majeures que nous avons séparé par chromatographie (phosphocellulose P11). La DNase "A" ne se lie pas à cette colonne contrairement à la DNase "B" qui co-elue en présence de sel avec la DNA polymérase α. Cette DNase "B" peut être copurifiée avec la polymérase sur DEAE-cellulose et DNA-cellulose (DNA dénaturé), on peut cependant les séparer sur agarose-heparine AMP type 2 et Sephacryl S-200. Mis à part leur poids moléculaire apparent semblable (environ 85kd), les 2 DNases ont des propriétés différentes puisque le type "A" ne se lie pas aux colonnes mentionnées. Par ailleurs, ces DNases sont des exonucléases 3'→5') produisant des désoxyribonucléotides 5'-monophosphate à partir de [3H]-TMP-DNA. Elles nécessitent des concentrations comparables de Mg++ et de KCl pour leur activité maximale et sont inhibées par les purines monophosphates. Ces 2 enzymes n'ont jamais été purifiées ensemble et leur étude pourrait permettre une meilleure compréhension des mécanismes impliqués dans la fidélité de transcription du DNA.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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