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Purification de la 17β-hydroxysteroide déhydrogénase de placenta humain par chromatographie d'affinité

Jean Côté
Fernand Labrie
Johanne Ouellet
Louise Lizotte
JC

Membre a labase

Jean Côté

Résumé du colloque

L'oxydation ou la réduction de la position 17 d'un androgène ou d'un estrogène a une influence majeure sur son activité biologique. Étant donné le rôle important de ces stéroïdes dans les cancers hormono-dépendants, nous avons purifié la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase de placenta humain. Les placentas humains provenant de grossesses normales furent homogénéisés dans du tampon 10 mM KH2PO4, 5 mM EDTA, 7 mM β-mercaptoéthanol, 20% glycérol pH 7.2. Le surnageant de centrifugation de 100 000 g, contenant l'activité soluble de l'enzyme est porté à 30% de saturation avec (NH4)2SO4. L'extrait est ensuite déposé sur une colonne de NAD-Sepharose (Pharmacia). L'activité enzymatique est éluée par un gradient de KH2PO4 et de DEAE-Sepharose. L'activité enzymatique est confirmée par la présence d'une bande à 35 kD sur gel de polyacrylamide contenant du SDS. L'enzyme a une concentration de 1 ng/µl (ELISA). Les mêmes anticorps utilisés en Western Blot permettent de détecter la présence de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase dans le placenta humain et le testicule du rat.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université de Moncton

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Titre du colloque :

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