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Purification de l'ARN messager codant pour l'enzyme fumarylacetoacetate hydrolase de rat

Louis Nicole
Robert M. Tanguay
Claude Labrecque
LN

Membre a labase

Louis Nicole

Résumé du colloque

Les désordres de tyrosinémie héréditaire aigüe et chronique sont caractérisés respectivement par une absence totale de l'enzyme fumarylacetoacetate hydrolase (FAAH) au niveau hépatique et rénal ou par une présence réduite de l'enzyme. Comme première étape pour déterminer au niveau génique le défaut moléculaire dans cette importante maladie héréditaire, nous avons tenté de purifier l'ARN messager codant pour l'enzyme impliqué, la FAAH. Un anticorps spécifique dirigé contre la FAAH a été utilisé pour enrichir les polysomes ayant des chaînes naissantes de FAAH, par immunoadsorption sur colonne de Protéine-A Sepharose. Cet ARN messager a été déprotéiné, absorbé sur oligo dT et caractérisé par traduction "in vitro" dans un lysat de réticulocytes. L'analyse sur gel de polyacrylamide SDS du produit de traduction révèle la présence d'un seul polypeptide majeur. Ce polypeptide a le même poids moléculaire (40,000) que la sous-unité de la FAAH et est immunoprécipité par un anticorps dirigé contre la FAAH. Cet ARN est utilisé pour le clonage du gène de la FAAH.

Contexte

Section :
Biologie cellulaire et moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire
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Purification de l'ARN messager codant pour l'enzyme fumarylacetoacetate hydrolase de rat
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