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Purification du RNA messager de la pyruvate kinase de foie de rat

J. Paquette
E. de Medicis
JP

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J. Paquette

Résumé du colloque

Le RNA total de foie de rat a été purifié par différentes méthodes: extraction au phénol, traitement au chlorure ou au thiocyanate de guanidine, centrifugation sur coussin de chlorure de césium et digestion des polysomes à la protéinase K. La méthode de centrifugation sur coussin de CsCl a été sélectionnée pour son rendement élevé en mRNA de haut poids moléculaire. L'étape suivante a été l'isolement des RNA messager par chromatographie d'affinité sur colonne d'oligo-dT. L'activité de traduction a été mesurée par incorporation de méthionine 35S dans un système de réticulocytes de lapin. La synthèse de pyruvate kinase L peut être mesurée par microchromatographie d'immunoaffinité. Des essais d'anticorps ont été réalisés par couplage sur Affigel-10, des anticorps spécifiques anti-pyruvate kinase L, eux-mêmes purifiés par chromatographie d'affinité sur colonne de pyruvate kinase L de foie de rat. Les conditions de la diète affectent la quantité de RNA messager, tel qu'éprouvé par son taux de traduction in vitro.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université du Québec à Trois-Rivières

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Titre du colloque :

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