Colloque

Purification d'une carboxylméthyltransférase protéique membranaire du cortex rénal

Dominique Boivin

Richard Beliveau

Denis Gingras

Membre a labase

Dominique Boivin

Résumé du colloque

Les carboxylméthyltransférases protéiques catalysent la réaction de transfert d'un groupement méthyl provenant du S-adénosyl-L-méthionine sur des résidus carboxyl d'une grande variété de protéines. Jusqu'à présent, ces activités enzymatiques n'ont été détectées que dans la fraction soluble de la plupart des cellules étudiées. Nous avons récemment identifié une activité méthyltransférase dans la membrane apicale des cellules du cortex rénal. Afin de caractériser cette activité au niveau moléculaire nous avons purifié l'enzyme. Les membranes isolées de reins de rats ont été solubilisées à l'aide du CHAPS, un détergent zwitterionique. L'enzyme a été purifiée par chromatographie d'exclusion moléculaire sur Superose 6 et par chromatographie d'échange ionique sur Mono Q. Le poids moléculaire déterminé par électrophorèse est de 27 kDa et de 25 kDa par chromatographie d'exclusion moléculaire. L'enzyme est inhibée à 100% par 5 µM sinefungin et à 95% par 10 µM S-adénosyl-L-homocystéine, deux inhibiteurs connus des méthyltransférases. La préparation enzymatique est exempte de substrats endogènes et ne contient plus que substrats exogènes comme γ-globuline, ribonucléase A > B > gélatine). Ces conditions représentent la première mise en évidence d'une localisation membranaire d'une activité méthyltransférasique.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université de Sherbrooke

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