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Purification et caractérisation de la Glutamyl-tRNA synthétase de Rhizobium Meliloti

Nathalie Champagne
Lucien M. Bordeleau
Jacques Lapointe
Serges Laberge
NC

Membre a labase

Nathalie Champagne

Résumé du colloque

La glutamyl-tRNA synthétase (GluRS) catalyse l'aminoacylation du tRNA glutamate. Le gène gltX de Rhizobium meliloti codant pour la GluRS a été cloné et séquencé (Laberge et al. 1989. J Bacteriol. 171: 3926-3932.). Comme nous voulons sonder les mutants dont la GluRS est altérée dans ses sites d'interaction avec ses substrats, nous avons d'abord purifié l'enzyme native de type sauvage. Après chromatographie d'affinité et échange d'anions FPLC (MonoQ HR5/5) on servit à sa purification. Nous observons deux bandes majeures après électrophorèse sur gel en présence de SDS, l'une à 56kD qui correspond à la GluRS et l'autre à 64kD qui correspond au facteur EF-Tu que déjà observé chez Escherichia coli et Bacillus subtilis. Les paramètres cinétiques (Km, Kcat) ont été déterminé avec le tRNA E. coli. Les Km pour le glutamate, l'ATP et le tRNA glutamate à pH 7.2 sont respectivement 130µM, 340µM et 0.80µM. Le "turnover number" est 0.50 sec-1. L'enzyme demeure stable jusqu'à 40°C.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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