Colloque

Purification et caractérisation d'une méthionine aminopeptidase (MAP) chez Streptococcus salivarius ATCC 25975

Elhoussine Boufous

Membre a labase

Elhoussine Boufous

Résumé du colloque

La MAP est l'enzyme responsable de l'enlèvement co-ou post-traductionnel du résidu Met N-terminal des protéines chez les eucaryotes et les procrayotes. La MAP enlève le résidu Met N-terminal uniquement quand le deuxième acide aminé de la protéine cible est l'alanine, la glycine, la sérine, la proline ou la thréonine. La protéine HPr du système de transport des sucres phosphotransférase: phosphoénolpyruvate-dépendant (PTS) possède un résidu Ala comme deuxième acide aminé. Néanmoins, on retrouve dans la cellule deux formes d'HPr: HPr-1 (sans Met) et HPr-2 (avec Met). On a démontré que le ratio HPr-1/HPr-2 varie selon les conditions de culture et la nature de sucre utilisé. Ces résultats suggèrent que l'activité de la MAP est soumise à des mécanismes de régulation. Afin d'élucider ces mécanismes, nous avons entrepris la purification de la MAP à partir d'extraits bruts de Streptococcus salivarius ATCC 25975 en utilisant le tétrapeptide Met-Gly-Met-Met comme substrat. Différentes étapes (chromatographie sur échangeur d'ions, chromatographie d'hydrophobicité, tamisage moléculaire, chromatofocusing) ont permis d'obtenir les résultats suivants: 1)- il existe au moins trois peptidases qui réagissent avec Met-Gly-Met-Met; 2)- la MAP représente une faible proportion de l'activité peptidasique et des protéines cellulaires; 3)- le poids moléculaire de l'enzyme a été estimé à 27 kDa par filtration sur gel Superdex 75 HR et à 30 kDa par SDS-PAGE; 4)- le point isoélectrique déterminé par chromatofocusing a été évalué à environ 4.5.