Colloque

Purification par HPLC d'anticorps monoclonaux humains

Denis Marfin

Bernard K. Brodeur

Sylvie Faucher

Membre a labase

Denis Marfin

Résumé du colloque

Une méthode a été mise au point dans le but de purifier les anticorps monoclonaux humains sécrétés en faibles concentrations (µg/ml) dans les surnageants de cultures cellulaires. Des hybridomes ont été cultivés dans du milieu IMEM additionné de 15% de sérum fœtal bovin, 1% de pyruvate, 2 mM de L-glutamine et 50 µg/ml de gentamycine. Des surnageants obtenus après croissance en culture furent concentrés par ultrafiltration et élimination des membranes par osmose inverse. Les molécules de poids moléculaires inférieurs à 1000 daltons. Les anticorps monoclonaux ont été purifiés par HPLC sur colonne d'hydroxyapatite. Ils ont été éludés de la colonne par un gradient de phosphate de sodium. Les anticorps monoclonaux humains ont ainsi été purifiés. Des dosages protéiques, des détections d'anticorps humains par des essais "Elisa" et des séparations sur gels de polyacrylamide ont permis de vérifier la pureté des immunoglobulines obtenues par cette méthodologie. Ce système permet la purification rapide des anticorps monoclonaux humains en employant des conditions non-dénaturantes.

Contexte

Section :

Microbiologie, virologie et immunologie

Thème du colloque :

Microbiologie, virologie et immunologie

Hôte : Université d’Ottawa

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Titre du colloque :

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