Colloque

Purification partielle de l'anhydrase carbonique de Spinacia oleracea L.

Nathalie Daigle

Peter A. Rogers

Pierre M. Charest

Membre a labase

Nathalie Daigle

Résumé du colloque

L'anhydrase carbonique (AC) (E.C. 4.2.1.1) est une enzyme responsable de l'hydratation réversible du CO2. Plusieurs isoformes de cette enzyme ont déjà été identifiées et caractérisées chez les cellules animales ainsi que chez l'algue Chlamydomonas reinhardtii. Nous avons partiellement purifié l'AC d'une plante vasculaire (Spinacia oleracea L.) pour des fins d'études selon un protocole différent de ceux déjà publiés. Les premières étapes de purification ont été, en deux précipitations différentielles, la première étant à l'acétone, la deuxième au sulfate d'ammonium, et une chromatographie sur DEAE-Sepharose. Les résultats de cette chromatographie montrent l'activité enzymatique pendant l'enrichissement d'une bande d'environ 30 kDa qui correspond au poids moléculaire connu des sous-unités de cette enzyme. Les étapes subséquentes ont été effectuées sur FPLC avec les colonnes suivantes: Mono Q HR 5/5, Superose 12 HR 10/30, Mono P HR 5/20 et finalement Mono Q HR 5/5. L'analyse sur gel SDS-PAGE des différentes fractions montre que l'AC est composée de deux bandes de mobilité légèrement différentes, indiquant une possible hétérogénéité moléculaire des sous-unités. L'électrofocalisation des protéines séparées en 2D suggère que la protéine existerait sous forme de variants isoélectriques.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université Laval

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