Colloque

Purification rapide et séparation des bandes isofonctionnelles de la glutamyl-tRNA synthétase de Escherichia coli

Shengxiang Lin

Jacques Lapointe

Anne Eklund

Membre a labase

Shengxiang Lin

Résumé du colloque

L'identification des sites d'interaction spécifique entre les aminoacyl-tRNA synthétases et les tRNA serait très utile pour comprendre les mécanismes qui assurent la fidélité de la traduction de l'information génétique. Ainsi, pour la cristallisation et l'analyse structurale de la glutamyl-tRNA synthétase (GLURS), nous avons utilisé la chromatographie FPLC pour la purifier rapidement et efficacement. Une purification a été faite à partir d'une souche carotte et les enzymes 30% les plus comparativement à son niveau dans une souche sauvage. La procédure a deux approches : un système à deux phases de polymères hydrosolubles et une seule étape de chromatographie sur une colonne d'échange d'ions (Mono Q). La GLURS présente dans les fractions où elle est la plus pure (en limit à 99% par gel SDS), a été deux fois d'activité spécifique plus élevée que obtenue avec les méthodes conventionnelles. Avec cette préparation, des petits cristaux de GLURS et du complexe GLURS-tRNA ont été obtenus, contenant deux fois moins de bandes (identifiées avec le phastsystem de Pharmacia), nous avons séparé ces deux phases par chromatofocalisation sur FPLC (Mono P) pour améliorer la qualité des cristaux de GLURS.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université Laval

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