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Reconstitution d'un transporteur membranaire du rein

Marie-Claude Delisle
Raynald Laprade
Richard Beliveau
Vincent Vachon
Sylvie Giroux
MD

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Marie-Claude Delisle

Résumé du colloque

Le phosphate est réabsorbé par un transporteur spécifique qui utilise l'énergie du gradient de sodium. Dans le but de purifier et d'identifier la protéine responsable de ce transport, nous avons mis au point un système de reconstitution qui permet de mesurer son activité après solubilisation de la membrane. Le transporteur s'est avéré particulièrement sensible aux conditions de solubilisation. Pour préserver son activité, des membranes luminales purifiées ont été solubilisées avec du CHAPS, en présence de glycérol, de lipides, de détergent, de sodium et de phosphate. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide montre que des protéines séparées avec de tels extraits protéiques sont riches en deux polypeptides protéiques. La captation du phosphate par les liposomes reconstitués est fortement stimulée par la présence d'un gradient de sodium. Une complète stimulation disparaît lorsque le gradient est dissipé par la monensine, un ionophore qui rend les membranes perméables au sodium. Le transport reconstitué possède une affinité pour le phosphate (Kt = 60 µM) semblable à celle du transporteur de la membrane d'origine. Il est aussi inhibé par l'arsenate, un inhibiteur connu du transport de phosphate. Ces propriétés nous permettent d'envisager la caractérisation de ce transporteur.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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