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Restauration de la sensibilité à la μ-conotoxine du canal sodique cloné du muscle squelettique de l'humain

Jocelyne Sirois
E Trottier
Julie St-Pierre
Mohamed Chahine
JS

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Jocelyne Sirois

Résumé du colloque

Les canaux sodiques voltage-dépendants sont des protéines membranaires qui jouent un rôle essentiel dans l’établissement de l’excitabilité cellulaire et dans le maintien des propriétés de conduction. Plusieurs canaux sodiques ont été clonés, séquencés exprimés dans des systèmes hétérologues comme les ovocytes de Xenopus laevis ou les lignées cellulaires de mammifères et caractérisés électrophysiologiquement et pharmacologiquement. Une variété de toxines naturelles agissent sur les canaux sodiques voltage-dépendants en se liant à des sites spécifiques de haute affinité. Nous avons déjà démontré que les canaux sodiques du muscle squelettique de l’humain(hSkM1) et ceux du rat(rSkM1) présentaient des similarités électrophysiologiques et pharmacologiques. Par exemple, rSkM1 et hSkM1 sont tous les deux sensibles à la tétrodotoxine (TTX). Cependant, hSkM1 est moins sensible à la β-CTX (IC50=1760±40nM) que rSkM1 (IC50=51,4±2,2nM) (22 fois moins sensible). Les régions extracellulaires putatives de hSkM1 et de rSkM1 diffèrent de 22 acides aminés localisés dans la région S5-S6, connue comme formant le pore du canal. Dans la région S5-S6 du domaine II, un seul acide aminé diffère entre hSkM1 (leucine 735) et rSkM1 (sérine 729). Dans cette étude, nous avons remplacé par mutagénèse dirigée, la leucine 735 chez hSkM1 par une sérine. L’affinité pour la β-CTX chez hSkM1/L735S était 9 fois plus grande (IC50=185,6±6,6nM) que celle du type sauvage hSkM1 due à une diminution du koff de 3,1 fois et à une augmentation du kon de 1,4 fois. Cette mutation n’a pas restaurée complètement la sensibilité à la β-CTX. Nos résultats suggèrent que le résidu sérine de rSkM1 joue un rôle important dans la liaison de la β-CTX. D’autres acides aminés peuvent être responsables de la différence entre hSkM1 et rSkM1 en terme de leur sensibilité à la β-CTX. Nous avons aussi remplacé le résidu sérine à la position 729 sur rSkM1 par cystéine et tester l'effet d'un agent methantiosulfonate, MTSET à une concentration de 1mM. Ni le MTSET ni l'ion cadmium ne bloquait les canaux sodique, suggérant que ce résidu ne participe pas à la formation du pore du canal mais plus probablement à son vestibule.

Contexte

Section :
Adaptation du myocarde au stress
news icon Thème du colloque :
Adaptation du myocarde au stress
manager icon Responsables :
Pascal Daleau
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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