Communication

Rôle de la boucle cytoplasmique reliant les domaines I et II sur la régulation des canaux calciques dépendants du potentiel membranaire

Laurent Berrou

Gérald Bernatchez

Lucie Parent

Membre a labase

Laurent Berrou

Résumé de la communication

Les canaux calciques activés par le potentiel membranaire sont composés de 3 protéines distinctes : les sous-unités alpha-1, bêta, et alpha2-delta. La cinétique du flux calcique à travers alpha1 est modulée par les sous-unités auxiliaires alpha2-delta et plus significativement par les bêta. Il est maintenant accepté que les bêta se lient directement sur la boucle cytoplasmique qui relie les domaines I et II d'alpha-1 au niveau du site AID (DeWaard et al., 1997). L'ancrage primaire de bêta requiert la séquence consensus suivante : QQXXXXLXGYXXWI qui est conservée dans les canaux A, B, C, D, E et S. Dans certains cas, cette région serait aussi impliquée dans la régulation par les protéines G. Étudier l'effet fonctionnel des résidus non conservés du site AID sur les cinétiques d'inactivation. Les mutations ponctuelles ont été obtenues par la méthode de mutagénèse U.S.E (Pharmacia Biotech). Les ARNm ont été transcrits in vitro et exprimés dans les ovocytes de Xénope. Les courants ont été mesurés par la méthode du voltage imposé à 2 électrodes en présence de 10 mM Ba2+. Le mutant a1E R378E, qui occupe la position 5 dans le site AID, s'inactive plus lentement et à des potentiels plus positifs que le canal sauvage a1E. En présence de bêta-3, les constantes d'inactivation sont de 538 ± 54 ms (n = 7) pour R378E et de 74 ± 4 ms (n = 3) pour a1E (t < 0.001). L'inactivation de R378E se produit à des voltages plus positifs avec V½ = -50 ± 1 mV (n = 7) qui contraste avec la valeur de -64 ± 2 mV (n = 3) pour a1E. Cette différence fonctionnelle persiste en absence de bêta alors que R378E s'inactive avec un taux de 518 ± 11 ms (n = 3) plutôt qu'un tau de 299 ± 20 ms (n = 3) pour a1E (t < 0.001). Nos résultats indiquent que le site AID est intrinsèquement impliqué dans l'inactivation des canaux calciques en plus d'être responsable de la liaison des sous-unités bêta. Cette conclusion est compatible avec les résultats que nous avons obtenus avec la chimère CEEE.

Contexte

Section :

Biophysique

Domaine de la communication :

Biophysique

Hôte : Université de Montréal

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