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Résumé du colloque
Les xylanases sont des hydrolases qui dégradent le xylane, un polymère constitué d'unités de D-xylose liées entre elles par des liaisons β-1,4. La comparaison de différentes séquences d'acides aminés de xylanases avec celles de levures a permis de cibler les acides aminés conservés. Dans le but de leur attribuer un rôle, ces acides aminés ont été substitués par mutagenèse dirigée et le gène ainsi altéré exprimé chez Escherichia coli. La conversion de l'Asp 124 en acide glutamique ou en arginine diminue l'activité catalytique de 5 et 9 fois respectivement. L'étude de la cinétique d'hydrolyse de différents oligosylosides (X, x Y) par l'enzyme non modifiée et les deux xylanases modifiées (D124E et D124R), a démontré la présence de deux modes ou mécanismes de clivage des liaisons β-1,4. Les mutations D124E et D124R altèrent de façon importante le mode majeur de clivage jusqu'à son abolition avec la mutation D124R. Le mode mineur n'est pas affecté chez la xylanase D124E mais il est diminué chez la xylanase D124R. Ces résultats indiquent que l'Asp 124 est probablement un sous-site de fixation du substrat, essentiel à la reconnaissance de ce dernier et impliqué dans le mode de clivage préférentiel.
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