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Rôle des acides aminés cystéines dans les propriétés pharmacologiques du récepteur D3 de la dopamine

Frédéric Filteau
Martine Tremblay
Daniel Lévesque
François Veilleux
FF

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Frédéric Filteau

Résumé du colloque

Les récepteurs dopaminergiques appartiennent à la superfamille des récepteurs couplés aux protéines G. Ils représentent des cibles pharmacologiques importantes pour les neuroleptiques utilisés dans le traitement des symptômes reliés à la schizophrénie. Parmi les récepteurs de la dopamine, le type D3 (D3R) constitue une cible moléculaire potentiellement responsable de l’activité antipsychotique des neuroleptiques. Afin de mieux comprendre les déterminants structuraux responsables des propriétés pharmacologiques et biochimiques uniques du D3R, une approche de mutagenèse dirigée fut employée. Les acides aminés cystéines (Cys) extracellulaires en positions 15, 102, 103 et 181 du D3R ont été remplacés par des sérines (Ser) et les récepteurs mutants ont été exprimés dans une lignée de cellules transfectées (CHO). Les résidus Cys, lorsque suffisamment rapprochés forment des liens disulfures (S-S) qui permettent de stabiliser la conformation de la protéine. Les effets du dithiothréitol (DTT), un agent réducteur des ponts S-S ainsi que du N-éthylmaléimide (NEM), un agent alkylant des groupements sulfhydryles libres, ont été analysés. Nous avons observé une diminution importante (jusqu’à 90%) de la densité de récepteurs, jumelée à de légères modifications de l’affinité du récepteur pour le radioligand [3H]spipérone en présence de ces agents. Ce résultat suggère un rôle des Cys dans la liaison au récepteur. D’autre part, nos études ont démontré que les mutants D3R Cys/Ser 103, 181 et 102/103, exprimés dans les cellules CHO, perdent totalement la capacité de lier le [3H]spipérone, alors que le mutant Cys102Ser conserve une faible affinité pour le radioligand. Les effets de la mutation Cys15Ser ainsi que du DTT et du NEM sur ce mutant sont semblables au D3R natif. Nos résultats démontrent donc que les résidus Cys103 et 181 sont essentiels au maintien de l’intégrité du site de liaison du D3R, probablement par l’intermédiaire d’un lien S-S. La Cys15 par contre ne semble pas impliquée dans la liaison du ligand. Les résultats obtenus suggèrent aussi que la Cys102 participe à la liaison du [3H]spipérone, mais ne semble pas intervenir dans la formation d’un pont S-S.

Contexte

Section :
Pharmacologie et toxicologie
news icon Thème du colloque :
Pharmacologie et toxicologie
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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