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Rôle des caspases dans la mort par apoptose de myélomes murins en culture

Eric Gauthier
Joël Charbonneau
EG

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Eric Gauthier

Résumé du colloque

La culture cellulaire est utilisée par l'industrie biotechnologique dans la production de protéines d'intérêt biomédical et pharmaceutique. Cependant, la mort cellulaire par apoptose limite considérablement le rendement de ces cultures. Afin d'étudier les mécanismes moléculaires d'induction de l'apoptose chez les cellules en culture, nous avons choisi le myélome Sp2/O-Ag14, qui est fréquemment utilisé comme partenaire de fusion dans la préparation d'hybridomes murins. La mesure de la viabilité cellulaire par la méthode de coloration au bleu trypan indiqua une diminution progressive du nombre de cellules viables en fonction du temps, pour atteindre 5% après 7 jours de culture. Cette diminution de la viabilité de Sp2/O s'accompagna de la dégradation de l'ADN génomique en fragments oligonucléosomaux, suggérant l'induction de l'apoptose. L'analyse Western de lysats de cellules SP2/O montra la dégradation rapide de la lamine B en un fragment de 21 kDa. La dégradation de la poly (ADP-ribose) polymérase (PARP) en un fragment de 85 kDa fut aussi observée. Ces résultats suggèrent que les protéases de la famille des caspases responsables de la protéolyse limitée de ces protéines cellulaires (CPP-32/caspase 3 pour PARP, Mch2/caspase 6 pour lamine B) sont impliquées dans l'induction de la mort par apoptose chez SP2/O. Afin de confirmer l'importance des caspases dans l'induction de l'apoptose lors de la culture de SP2/O, nous avons transfecté ces cellules avec un vecteur d'expression contenant l'ADNc encodant la protéine p35 du baculovirus, un inhibiteur des caspases. L'analyse de la croissance du transfectant 1B1 montra une augmentation de la viabilité cellulaire par rapport aux cellules SP2/O contrôles (45% pour 1B1 vs 5% pour SP2 après 7 jours de culture). Nos résultats démontrent l'utilité potentielle des inhibiteurs des caspases afin d'augmenter la viabilité des myélomes murins en culture.

Contexte

Section :
Biologie cellulaire
news icon Thème du colloque :
Biologie cellulaire
manager icon Responsables :
Alan Anderson
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

Biologie cellulaire
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