Colloque

Stratégie de purification des capillaires du cortex cérébral de rat

Lise Thibault

Richard Beliveau

Membre a labase

Lise Thibault

Résumé du colloque

Plusieurs substances circulant dans le sang ne peuvent atteindre le système nerveux central car ne s'y rendent qu'en faibles quantités. Ce sont les cellules endothéliales des capillaires cérébraux, constituant la barrière hématoencéphalique qui possèdent divers systèmes de transport qui assurent ce rôle de sélectivité membranaire. Avant de caractériser plus précisément au niveau subcellulaire les systèmes de transport, nous avons voulu mettre au point une méthode de purification à haut rendement de ces capillaires. Pour ce faire, diverses méthodes déjà établies faisant intervenir des centrifugations différentielles sur gradient de Ficoll ou de Dextran ont été combinées dans différents protocoles de purification. L'utilisation de 20 % Ficoll est très efficace pour l'élimination du matériel myéliné et la myéline; une distribution des capillaires à l'interface et dans le culot est ensuite obtenue par perfusion d'un gradient discontinu de 15-20 % Dextran. La perfusion du cortex cérébral par une solution saline (0.9% NaCl) via la carotide n'améliore pas significativement le rendement de l'opération. Les mêmes conclusions sont obtenues en présence de EDTA (5.9 mM) dans un milieu physiologique. La fraction finale relâche un rendement optimal de 1.2 mg par gramme de cortex avec un enrichissement de 14 en glutamyl transpeptidase, un marqueur spécifique de la membrane luminale de l'endothélium. Le rendement biologique élevé ainsi obtenu assure donc la validité de la procédure comme étape de purification des membranes.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire

Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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