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Surproduction et caractérisation de la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase exprimée dans un système d'expression de baculovirus

Rock Breton
Bing Li
Arezki Azzi
Sheng-Xiang Lin
RB

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Rock Breton

Résumé du colloque

La double réaction de déshydrogénation et d'isomération qui permet la conversion des précurseurs stéroïdiens Δ5-3β-hydroxy en leur configuration Δ4-3-céto, est l'étape limitante, du point de vue cinétique, de la biosynthèse de toutes les classes de stéroïdes hormonaux. Cette double réaction est catalysée par une seule enzyme membranaire, la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-HSD). Pour faciliter sa purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structure-fonction, nous avons surproduit la 3β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus recombinant. Ce baculovirus porte, dans son génome, le cDNA de la 3β-HSD dont l'expression est placée sous le contrôle du promoteur de la polyhédine. Les cellules d'insectes infectées sont lysées soixante heures post-infection et la concentration en protéines déterminée. L'activité spécifique de la 3β-HSD dans l'extrait cellulaire est d'environ 4,5 U/mg ce qui représente un enrichissement de 7 à 8 fois par rapport au niveau normal observé dans le placenta. La 3β-HSD a été partiellement purifiée, plus que de 6 fois, avec une colonne Concanavaline A. L'enzyme possède une poids moléculaire identique à la 3β-HSD d'origine humaine.

Contexte

Section :
Biochimie, biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Rimouski

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Titre du colloque :

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