Colloque

Surproduction par le système de baculovirus/cellules Sf-9 de deux enzymes impliquées dans la maturation des prohormones polypeptidiques

Alain Boudreault

Michel Chrétien

Nabil G. Seidah

Normand Rondeau

Claude Lazure

Membre a labase

Alain Boudreault

Résumé du colloque

Notre équipe a récemment cloné deux DNA complémentaires codant pour les protéines mPCI et mPC2. Ces deux protéines ont récemment été rapportées comme étant des enzymes capables de couper les prohormones polypeptidiques au pairs d'acides aminés basiques produisant ainsi des hormones biologiquement actives. Afin de caractériser davantage ces deux protéines, nous avons cloné les DNA dans le vecteur pJVN de L.I.'isolement des recombinants de baculovirus devrait alors nous permettre de produire une grande quantité de protéines pouvant atteindre des ng/l de milieu de culture. Nous avons pu purifier ces protéines par affinité à l'aide d'anticorps développés contre la forme recombinante des deux protéines. Pour ce faire, nous avons inséré les DNAc correspondants dans des bactéries GEX2T en phase avec le gène de la glutathione S-transférase(GST). L'induction des bactéries transformées par les indus nous a permis de produire des protéines GST-mPCI et GST-mPC2. Après purification sur glutathionine et analyse par SDS-PAGE, nous constatons que la protéine GST-mPCI est produite à un taux de 5 à 8 mg/l de culture alors que GST-mPC2 l'est seulement qu'à 150 à 200 µg/l de culture.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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