Colloque

Synthèse d’un transcrit infectieux à partir de l’ADNc du virus de la mosaïque du navet (TuMV)

Sylvie Wittmann

Jean-François Laliberté

Membre a labase

Sylvie Wittmann

Résumé du colloque

Le TuMV est associé à des pertes économiques importantes dans le domaine de l’agriculture. Son génome est composé d’un ARN ss de 10000 nt et de polarité positive codant pour une polyprotéine. Cette dernière conduit à la libération de neuf protéines sous l’action de protéases virales. Afin d’étudier l’implication des protéines virales, il faut générer un ADNc du génome viral. La synthèse de l’ADNc est réalisée à l’aide de la technique d’Okayama et Berg. Il s’agit de préparer un vecteur/arnc qui contient une extrémité poly-I de 40 nt. L’ARN viral étant polyadénylé en 3’ est hybridé au vecteur/arnc. On procède à la synthèse de l’ADNc à l’aide de la réverse transcriptase, suivi de la synthèse du second brin en utilisant l’ADN polymérase I d’E. coli. Cette technique offre l’avantage d’éviter l’étape de ligation au vecteur étant donné que la synthèse de l’ADNc est amorcée directement au vecteur. En amont de l’ADNc, une séquence correspondant au promoteur de la polymérase du bactériophage T7 sera ajoutée. Elle est essentielle afin de générer des ARN synthétiques ou transcrits. La présence d’infection chez la plante à partir des transcrits suggère que l’ADNc est une copie intégrale du génome virale. Jusqu’à maintenant, il a été possible de générer un ADNc de 3000 pb (1/3 du génome viral). L’utilisation d’amorces internes nous permettront de réaliser l’ADNc complet.

Contexte

Section :

Biochimie, biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biochimie, biologie moléculaire

Hôte : Université du Québec à Chicoutimi

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Titre du colloque :

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