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Synthèse et caractérisation de la spermidine-C2-bodipy, une sonde hautement fluorescente pour la détection du transport des polyamines

Denis Soulet
René Charest-Gaudreault
Laurence Covassin
Nathalie Fugère
Richard Poulin
DS

Membre a labase

Denis Soulet

Résumé de la communication

Le mécanisme d'internalisation des polyamines par leur transporteur membranaire demeure encore inconnu. Un nouveau conjugué de spermidine hautement fluorescent (Spd-C2-BODIPY) a été synthétisé par couplage de la BODIPY-N''-iodoacetylethylenediamine au groupement thiol de la N4-(mercaptoéthyl)spermidine. La molécule résultante s'est comportée comme une sonde extrêmement sensible et spécifique du transport des polyamines chez les cellules de mammifères et de levure. L'accumulation de le Spd-C2-BODIPY chez les cellules CHO est initialement linéaire et atteint un seuil maximal qui peut être augmenté par traitement avec la cycloheximide, ce qui indique que les propriétés cinétiques du transport du Spd-C2-BODIPY sont comparables à celles des polyamines naturelles (spermidine, spermine). Comme dans le cas du transport des polyamines naturelles, la déplétion initiale en polyamines résultant de l'inhibition de la biosynthèse intracellulaire conduit à une augmentation de l'accumulation du Spd-C2-BODIPY. L'accumulation du Spd-C2-BODIPY est diminué de 85-90% chez une lignée CHO mutante hautement déficiente en transport des polyamines. Par microscopie confocale, nous avons établi que le Spd-C2-BODIPY internalisé se retrouve concentré dans des microvésicules par un mécanisme analogue à l'endocytose, mais distinct de l'endocytose médiée par le récepteur, tel que révélé par l'observation de la transferrine-Texas Red. En conclusion, le Spd-C2-BODIPY est une sonde de très grande sensibilité qui reflète de façon étroite le comportement du substrat naturel (i.e. la spermidine), et qui permettra de mieux comprendre le mécanisme de transport et de compartimentation intracellulaire des polyamines.

Contexte

Section :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Thème du communication :

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