Colloque

Transfection et expression de l'ADNc humain codant pour la fumarylacétoacétate hydrolase dans les cellules CV-1

Yves Labelle

Daniel Phaneuf

Robert M. Tanguay

Membre a labase

Yves Labelle

Résumé du colloque

La tyrosinémie héréditaire de type I est une maladie autosomale récessive causée par une déficience de la dernière enzyme du sentier de dégradation de l'acide aminé tyrosine, la fumarylacétoacétate hydrolase (FAH: EC 3.7.1.2). Des anticorps ont été préparés contre la FAH purifiée de foie de rat et de foie humain et ont été utilisés pour cribler des librairies d'ADNc construites dans le vecteur d'expression λgt-11. Les clones ont été validés par traduction in vitro de l'ARNm sélectionné par hybridation avec l'ADNc cloné puis par immunoprécipitation et analyse sur gel de polyacrylamide des produits de traduction. La séquence nucléotidique de l'ADNc et la traduction de la séquence de leur code par les ordinateurs ont permis de déterminer les fragments peptidiques séquencés de la protéine. L'ADNc humain a été transféré dans le vecteur d'expression pSV2 et transfecté dans les cellules de singe CV-1. L'ADNc est exprimé dans ces cellules et l'analyse par immunobuvardage a démontré l'apparition de l'activité enzymatique de la FAH et l'hydrolyse de l'acide fumarylacétoacétate in vitro. Comme la FAH est un dimère d'environ 80,000 daltons, ces résultats indiquent que l'ADNc isolé contient toute l'information génétique nécessaire à la production d'une protéine active.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université Laval

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