pen icon Colloque
quote

Une méthode manuelle de dégradation d'Edman à haute sensibilité pour la détermination de la séquence des peptides

Serge Nolet
Simon Lemaire
SN

Membre a labase

Serge Nolet

Résumé du colloque

Une méthode manuelle de dégradation d'Edman combinée à la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est proposée. La réaction de couplage entre le phenylisothiocyanate (PITC) et le résidu en N-terminal du peptide a lieu dans un tampon de diméthylallylamine (pH 9,5) à 56°C pendant 30 min. On élimine les excès de réactif et les produits secondaires avec le 1-cl-butane, ceci en maintenant les pertes de peptide à cette étape. L'utilisation de HCl 12 N pour cliver l'acide aminé en N-terminal réduit l'accumulation de sels observée avec l'acide trifluoroacétique. Ceci nous permet de séquencer un plus grand nombre de résidus dans un peptide. Le thiazolinone est converti en dérivé phenylthiohydantoin (PTH), en présence de HCl 1 N à 80°C pendant 10 min. Le PTH-acide aminé est détecté directement par son absorbance dans l'ultra-violet à 254 nm après passage sur HPLC. Il peut aussi être hydrolysé en l'acide aminé original et après réaction avec l'o-phthaldialdéhyde, détecté par fluorescence sur HPLC. Cette dernière méthode d'analyse est très sensible et a une limite de détection de 1 pmol. Une technique similaire appliquée à la détermination de la séquence de quelques neuropeptides, tels que la dynorphine-(1-13), la leu-enképhaline et la substance P avec des quantités aussi faible que 1 à 5 nmol.

Contexte

Section :
Pharmacologie et toxicologie
news icon Thème du colloque :
Pharmacologie et toxicologie
host icon Hôte : Université Laval

Découvrez d'autres communications scientifiques

news icon

Titre du colloque :

Pharmacologie et toxicologie
L'usage d'alcool chez la femme: nouveau modèle psycho-social
Antoinette Zeiter
Métabolisme du triméthyl-1,2,3-benzène chez le lapin
Souheil Laham
Syndrome létal inexpliqué chez les rats traités à l'aide d'un conjugué antiAFP-daunorubicine
Jean Deschênes
Voir tous les contenus de ce colloque

Autres communications du même congressiste :

news icon

Thème du colloque :

Pharmacologie et toxicologie
Une méthode manuelle de dégradation d'Edman à haute sensibilité pour la détermination de la séquenc…
Serge Nolet
Structure de l'ADN complémentaire d'une protéine sécrétoire prostatique simienne de 94 acides aminé…
Serge Nolet
Structure de l'ADN complémentaire d'une protéine sécrétoire prostatique simienne de 94 acides aminé…
Serge Nolet