Colloque

Usage des didésoxynucléotides pour la réduction de la recircularisation du vecteur lors de clonage d'A.D.N.

François Denis

Benoît Gamache

Claude V. Déry

Ryszard Brzezinski

Danielle Desmarais

Membre a labase

François Denis

Résumé du colloque

L'efficacité de clonage de fragments d'A.D.N. peut être augmentée en réduisant la recircularisation du vecteur, favorisant ainsi la ligation entre le vecteur et les insertions. La désphosphorylation, méthode généralement utilisée à cette fin, est efficace à environ 90%. Nous avons développé une technique difficile à inactiver ce qui complique la procédure (MANIATIS, T. et al.). Nous avons développé une méthode simple qui permet de réduire la recircularisation du vecteur lors du clonage de fragments avec des extrémités 5' saillantes ou franches. La méthode consiste à incorporer un didésoxynucléotide en position 3' terminale du site. En vertu de leur structure, les didésoxynucléotides ne peuvent former de ponts 3'-5' phosphodiester, ce qui réduit la ligation intra-moléculaire. Notre méthode réduit la recircularisation du vecteur de manière comparable ou supérieure à la déphosphorylation avec un minimum de manipulations.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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