Colloque

Utilisation d'ARNm lymphocytaire pour l'identification de mutations dans des gènes principalement exprimés dans des tissus humains inaccessibles

Sabina Halappanavar

M. R. Ven Murthy

Pierre Julien

Membre a labase

Sabina Halappanavar

Résumé du colloque

L'identification de mutations spécifiques à certains gènes est généralement obtenue par amplification au PCR et séquencage des exons en utilisant de l'ADN génomique. Cette procédure est parfois laborieuse à réaliser pour des gènes qui ont un grand nombre d'exons. Alternativement, l'ARNm peut être extrait de tissus dans lequel le gène s'exprime en abondance, et à partir duquel l'ADNc pourrait être préparé et utilisé pour le séquencage automatique par RT-PCR. Cette approche n'est toutefois pas réalisable dans les cas où le gène étudié s'exprime principalement dans des tissus qui ne peuvent pas être biopsiés. Dans ce présent rapport, nous proposons une méthode de préparation d'ADNc à partir d'ARNm de lymphocytes sanguins qui peuvent produire de l'ARNm généralement reconnu pour être présent uniquement dans ces tissus inaccessibles. La lipoprotéine lipase (LPL), une enzyme critique dans le métabolisme des lipoprotéines, est principalement exprimée dans les tissus musculaires et adipeux qui sont plus difficiles à biopsiés que les cellules sanguines. Nous avons démontré que l'ARNm de la LPL est produite en quantité détectable dans les lymphocytes bien qu'elle n'ait pas de fonction biologique connue dans ces cellules. Ce processus est appelé transcription illégitime. Nous décrivons donc la production d'ADNc de la LPL à partir de lymphocytes ainsi que le séquencage du gène de la LPL chez un patient atteint de déficience familiale en LPL. La mutation responsable de cette déficience a été localisée dans l'exon 9 (Serine447stop) qui se termine prématurément en affectant l'activité de la LPL. Cette approche pourrait donc être utile pour la détection de mutations inconnues à partir d'ARNm de tissus humains inaccessibles.