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Utilisation de microsphères de latex pour l’observation in vitro de myotubes hybrides

CL

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Claude Labrecque

Résumé du colloque

La formation de myotubes hybrides (contenant des noyaux originant de deux populations différentes) in vitro n’a jamais pu être observée sans sacrifier la culture. La création de microsphères de latex imprégnées de marqueurs fluorescents (Katz 1984) nous donne le moyen d’observer l’hybridation cellulaire avant de fixer nos cultures. Nos expériences ont été faites à l’aide de cultures de myoblastes de rat Sprague-Dawley. Des myoblastes normaux ont été cultivés 48 h en présence de 1µM de 5-Bromo 2-Déoxyuridine (BrdU) analogue à la thymidine, et ont été mis par la suite en présence de microsphères au latex contenant de la fluorescéine. Les myoblastes ainsi marqués ont été ajoutés à des cultures de myoblastes cultivés en présence de microsphères contenant de la rhodamine. L’observation en microscope à fluorescence des deux types de microsphères dans une même myotube nous permet de conclure que ce myotube est hybride. Nous nous sommes assurés de la présence réelle de l’hybridation en révélant la BrdU avec un anticorps monoclonal. Cette nouvelle technique nous permet d’identifier les myotubes hybrides avant de sacrifier les cultures.

Contexte

news icon Thème du colloque :
Biologie cellulaire
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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