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Utilisation d’un aptamère d’ARN pour purifier la petite ribonucléoprotéine nucléolaire snR30

Vincent Lemay
Krasimir Spasov
François Dragon
VL

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Vincent Lemay

Résumé de la communication

Des dizaines de petites ribonucléoprotéines nucléolaires (snoRNP) participent à la maturation des ARN ribosomiques (ARNr). Ces snoRNP sont constituées d’une molécule d’ARN (snoRNA) et de quelques protéines. Les snoRNA de la famille H/ACA servent de guides pour les réactions de pseudouridylation, c’est-à-dire la conversion d’uridines en pseudouridines. Contrairement aux autres snoRNP H/ACA, snR30 n’a pas de cible pour la pseudouridylation mais cette snoRNP participe aux réactions de clivage essentielles à la production de l’ARNr 18S du ribosome. Notre hypothèse est que snR30 possède des protéines spécifiques qui contribuent à ses propriétés fonctionnelles uniques. Le but de notre recherche est de purifier le complexe snR30 et d’identifier ses composantes protéiques. Nous avons introduit un aptamère dans la séquence de snR30. Les aptamères sont de courtes séquences d’acides nucléiques ayant une grande affinité et spécificité pour de petites molécules. L’aptamère S1 se lie spécifiquement à la streptavidine. Nous avons généré des souches de levure Saccharomyces cerevisiae qui expriment le snoRNA S1-snR30 et nous avons préparé des extraits cellulaires afin de purifier le complexe S1-snR30 par chromatographie d’affinité avec des billes de streptavidine. Le snoRNA S1-snR30 est fonctionnel in vivo puisque les souches de levure qui l’expriment peuvent croître normalement. Les snoRNP modifiées ont été purifiées par chromatographie d’affinité : nos résultats de marquage au pCp, d’hybridation Northern et d’immuno-buvardage démontrent que le snoRNA S1-snR30 est spécifiquement retenu sur les billes de streptavidine et qu’il est associé à des protéines de la classe H/ACA telles Gar1 et Nhp2. Nous procédons actuellement à l’optimisation de cette procédure pour identifier les protéines du complexe par spectrométrie de masse.

Contexte

Section :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Thème du communication :

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