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Vecteurs d'expression pour moduler le niveau d'une glutathion peroxydase sélénium-indépendante dans des cellules mammifères

Lyne Lavoie
Marc-Édouard Mirault
LL

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Lyne Lavoie

Résumé du colloque

Nous voulons étudier le rôle et la fonction d'une glutathion S-transférase qui a une activité peroxydase (GST-GPx), dans le métabolisme des peroxydes et la résistance cellulaire à divers agents oxydants. Des vecteurs d'expression ont été construits afin de surexprimer à des degrés variables l'activité GST-GPx/Yc de rats dans des cellules humaines d'origine épithéliale. Nous avons fusionné un cDNA codant pour cet enzyme (reçu du Dr. C. Pickett) aux promoteurs transcriptionnels suivants: 1) E1 du cytomégalovirus humain (HCMV) conférant une expression constitutive (élevée 2) MMTV qui est inductible par des stéroïdes et 3) MMTV avec enhancer HCMV, afin d'augmenter le niveau d'induction. Un site de polyadénylation a été ajouté à l'extrémité 3' du cDNA. Ces gènes chimériques ont été introduits dans un plasmide pML conférant la résistance à l'hygromycine B. Ces plasmides sont actuellement employés pour transfecter des cellules humaines T47D et A549 afin d'obtenir des clones produisant à des niveaux variables la GST-GPx. Les clones obtenus seront d'abord caractérisés quant à leur résistance aux peroxydes, induite par des promoteurs et autres et des dérivés de l'acide arachidonique impliqués dans les réponses inflammatoires, et quant à leur sensibilité à divers agents inducteurs de peroxydation lipidique.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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Thème du colloque :

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