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Colloque
Les membranes de bordure en brosse (m.b.b.) purifiées à partir de jéjunum de lapin forment des vésicules closes de 0.5 µm de diamètre en présence du D-glucose-1-ic. Différentes caractéristiques du système de transport ont été étudiées : dépendance du système pour les ions Na+, stéréospécificité (isomères optiques et anomères), inhibition par la phloridzine ou les inhibiteurs des groupements sulfhydryls, influence de la force osmotique. Le transport du glucose stimulé par les ions Na+ est dépendant de la nature de l'anion qui accompagne les ions Na+ dans le milieu de sels (SCN- > Cl- > SO4--). Les m.b.b. obtenues de jéjunum …
Colloque
Les membranes de bordure en brosse (m.b.b.) purifiées à partir de jéjunum de lapin forment des vésicules closes de 0.5 µm de diamètre en présence du D-glucose-1-ic. Différentes caractéristiques du système de transport ont été étudiées : dépendance du système pour les ions Na+, stéréospécificité (isomères optiques et anomères), inhibition par la phloridzine ou les inhibiteurs des groupements sulfhydryls, influence de la force osmotique. Le transport du glucose stimulé par les ions Na+ est dépendant de la nature de l'anion qui accompagne les ions Na+ dans le milieu de sels (SCN- > Cl- > SO4--). Les m.b.b. obtenues de jéjunum …
Colloque
Les membranes de bordure en brosse (m.b.b.) purifiées à partir de jéjunum de lapin forment des vésicules closes de 0.5 µm de diamètre en présence du D-glucose-1-ic. Différentes caractéristiques du système de transport ont été étudiées : dépendance du système pour les ions Na+, stéréospécificité (isomères optiques et anomères), inhibition par la phloridzine ou les inhibiteurs des groupements sulfhydryls, influence de la force osmotique. Le transport du glucose stimulé par les ions Na+ est dépendant de la nature de l'anion qui accompagne les ions Na+ dans le milieu de sels (SCN- > Cl- > SO4--). Les m.b.b. obtenues de jéjunum …
Colloque
Des membranes de bordure en brosse d'entérocyte de lapin (m.b.b.) sont exposées à différentes concentrations de Triton X-100, d'EDTA et de diodosalicytate de lithium (LIS) en vue d'obtenir une solubilisation préférentielle de ces constituants. Après centrifugation, le centum protéique et glycoprotéique des lots sur gel de polyacrylamide de Triton X-100, à des concentrations supérieures à 0,05%, solubilise principalement les protéines enzymatiques associées à ces activités enzymatiques peuvent être dissociées. Les protéines associées peu ou pas dans l'ensemble de la solubilisation est peu spécifique. L'ensemble des résultats sont mis en association avec l'EDTA (1-10 mM) et LIS (0.2 M), les concentrations …
Colloque
La méthode décrite par Schmitz et al. (Biochim. Biophys. Acta, 323 (1973) 98-112) pour la purification de la membrane de la bordure en brosse (m.b.b.) à partir d'intestin humain a été utilisée pour la purification de m.b.b. d'intestin et de cortex rénal, chez le lapin. Il est donc possible d'obtenir une membrane dénuée de ces débris de microvillosités. Les rendements protéiques des m.b.b. sont de 6.5% et de 5.0% pour l'intestin et le rein respectivement. L'analyse des activités sucrase, phosphatase alcaline, γ-glutamyltransférase, leucynaphthylamidase et tréhalase montre des coefficients de purification de 10 x en ordre de grandeur (enrichissement de 10 …
Colloque
La méthode décrite par Schmitz et al. (Biochim. Biophys. Acta, 323 (1973) 98-112) pour la purification de la membrane de la bordure en brosse (m.b.b.) à partir d'intestin humain a été utilisée pour la purification de m.b.b. d'intestin et de cortex rénal, chez le lapin. Il est donc possible d'obtenir une membrane dénuée de ces débris de microvillosités. Les rendements protéiques des m.b.b. sont de 6.5% et de 5.0% pour l'intestin et le rein respectivement. L'analyse des activités sucrase, phosphatase alcaline, γ-glutamyltransférase, leucynaphthylamidase et tréhalase montre des coefficients de purification de 10 x en ordre de grandeur (enrichissement de 10 …
Colloque
La méthode de purification utilisée permet d'obtenir des membranes de bordure en brosse (m.b.b.) dans un état de pureté tel qu'il permet l'étude de leur composition protéique. Les m.b.b. ont été solubilisées par des détergents ioniques (sodium dodecyl sulfate: SDS, désoxycholate) et non-ioniques (Triton, Lubrol) à différentes concentrations (0.01-1%). Les résultats biochimiques et les profils électrophorétiques montrent que le SDS est l'agent de solubilisation le plus efficace; même à faible concentration (0.05%) il permet une bonne solubilisation des protéines membranaires. Après traitement des m.b.b. par 1% de SDS et électrophorèse, les profils électrophorétiques des m.b.b. provenant de duodénum, jéjunum et …
Colloque
Le N-éthylmaléimide (NEM) et le p-chloromercuribenzenesulfonate (PCMBS), ont été utilisés pour étudier un site d'affinité pour le glucose dans la membrane jéjunale de la bordure en brosse d'entérocyte (m.b.b.). Après double marquage isotopique avec le NEM, en présence et en absence de D-glucose, puis solubilisation au sodium dodecyl sulfate (SDS) et électrophorèse sur gel de polyacrylamide, on marque préférentiellement une bande protéique possédant une mobilité relative (Rm) de 0.56 qui ne réagit pas au réactif de Schiff. Ce site d'affinité représentant 17% du nombre total des dpm déposés sur le gel, respectivement en absence et présence de D-glucose. Le traitement …
Colloque
Les membranes obtenues à partir de fragments chirurgicaux de duodénum, jéjunum et iléon sont incubées en présence de sodium dodecyl sulfate (SDS), Triton X-100, Lubrol et désoxycholate, à différentes concentrations. Pour les études de solubilisation, les protéines et les différentes enzymes membranaires (Maltase (M), Lactase (L), Sucrase (S), Théalase (T), phosphatase alcaline (PA), γ-glutamyltransferase (GGTPase) et Leucylnaftylamidase (LNAase)) sont dosées dans les culots et les surnageants obtenus après centrifugation des membranes à 114,000 g pendant une heure. Les enzymes membranaires furent déterminées après des temps d'incubation variable (0, 2, 24, et 48 heures) et exprimées en pourcentage de l'activité observée …
