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Colloque
La 17beta-hydroxystéroïde déhydrogénase est une enzyme clé pour la synthèse des hormones actif à partir des précurseurs stéroïdiens. Elle catalyse une réaction d'oxido-réduction réversible entre l'estradiol et l'estrone en présence des cofacteurs NAD(H) ou NADP(H). Cette enzyme est capable d'utiliser les deux cofacteurs NAD(H) et NADP(H), mais avec une affinité 100 fois plus élevée pour le NADP+ par rapport au NAD+. Pour comprendre la base structurale de la liaison des cofacteurs, nous avons résolu par crystallographie trois structures tridimentionnelles de la 17beta-HSD1 en liaison avec le NAD à une résolution de 2.5 A, et en liaison avec un inhibiteur (EM553) …
Colloque
La 17beta-hydroxystéroïde déhydrogénase est une enzyme clé pour la synthèse des hormones actif à partir des précurseurs stéroïdiens. Elle catalyse une réaction d'oxido-réduction réversible entre l'estradiol et l'estrone en présence des cofacteurs NAD(H) ou NADP(H). Cette enzyme est capable d'utiliser les deux cofacteurs NAD(H) et NADP(H), mais avec une affinité 100 fois plus élevée pour le NADP+ par rapport au NAD+. Pour comprendre la base structurale de la liaison des cofacteurs, nous avons résolu par crystallographie trois structures tridimentionnelles de la 17beta-HSD1 en liaison avec le NAD à une résolution de 2.5 A, et en liaison avec un inhibiteur (EM553) …
Colloque
La 17β-HSD œstrogénique humaine est une enzyme clé du métabolisme des œstrogènes. Elle catalyse l’interconversion entre l’estrone et l’estradiol et moins spécifiquement entre le DHEA et l’androstènedione. L’estradiol et les Δ5-diol stimulent la prolifération des cellules du cancer du sein. La 17β-HSD est un dimère de 68 kDa composé de deux sous-unités identiques de 34 kDa chacune. Nous avons étudié la dissociation-dépendante de la concentration des dimères, par la fluorescence d’anisotropie. À la suite de la dilution d’une solution 17β-HSD purifiée, la fluorescence d’anisotropie diminue de façon progressive. Cette diminution de la fluorescence d’anisotropie résulte de la dissociation du dimère …
Colloque
La 17β-Hydroxysteroïde déshydrogénase (17β-HSD) présente dans la fraction soluble du placenta humain catalyse l'inter-conversion de l'estrone en estradiol en présence de NAD+ ou NADP+. Nous avons rapporté récemment la purification des formes holoenzyme (avec NADP+) et apoenzyme de la 17β-HSD. Afin d'étudier les interactions enzyme-ligands par les méthodes fluorométriques, nous avons étudié les interactions entre la forme apoenzyme de la 17β-HSD et les conjugués d'aniline, acide sulfonique et de toluidinylnaphtalène chloré qui sont des sondes de fluorescence. Nos résultats montrent que ces composés se lient uniquement aux régions hydrophobes de la 17β-HSD et stimulent la fluorescence de l'enzyme à divers …
Colloque
La 17β-HSD est responsable de la formation de tous les estrogènes et androgènes actifs dans les tissus gonadiques ou périphériques, qui sont responsables de la prolifération des cancers hormonodépendants, particulièrement le cancer du sein et celui de la prostate (Horwitz et McGuire 1987, Labrie et coll. 1989). Nous avons étudié le mécanisme d'inhibition de composés à doubles sites d'action (par exemple EM-139 et EM-105), synthétisés dans notre laboratoire. Nous avons utilisé les méthodes fluorimétriques, spectrophotométriques et de marquages radioactifs et nous avons déterminé les constantes d'inhibition. Nos résultats montrent que les composés étudiés sont des inhibiteurs réversibles et ont été …
Colloque
La 17B-hydroxystéroïde déshydrogénase (17B-HSD) est responsable de la conversion des stéroïdes surrénaliens en androgène et estrogène qui stimulent le cancer de la prostate et le cancer du sein. Les formes apoenzyme et holoenzyme (complexe avec le NADP+) de la 17B-HSD de placenta humain sont préparées à l'aide d'une chromatographie d'affinité en utilisant différentes conditions d'élution avec la technique de FPLC. L'apoenzyme est obtenue en éluent avec le NAD+ et une colonne de "bleu-Sepharose". Le NAD+ est ensuite séparé sur une colonne à interaction hydrophobique ("phenyl-Sepharose") ou sur une colonne à échangeuse d'anions ("Mono Q"). L'holoenzyme est préparée en éluent avec …
Colloque
La double réaction de déshydrogénation et d'isomération qui permet la conversion des précurseurs stéroïdiens Δ5-3β-hydroxy en leur configuration Δ4-3-céto, est l'étape limitante, du point de vue cinétique, de la biosynthèse de toutes les classes de stéroïdes hormonaux. Cette double réaction est catalysée par une seule enzyme membranaire, la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-HSD). Pour faciliter sa purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structure-fonction, nous avons surproduit la 3β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus recombinant. Ce baculovirus porte, dans son génome, le cDNA de la 3β-HSD dont l'expression est …
