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Colloque
L’analyse du génome de Pseudomonas aeruginosa nous a permis d’identifier les gènes qui codent pour la GluRS, la GlnRS, l’AspRS et une amidotransférase (AdT). Par ailleurs, le gène encodant l’AsnRS n’a pas été identifié. Ces observations nous ont amenés à tester la présence chez P. aeruginosa des sentiers de synthèse du Gln-ARNtGln et du Asn-ARNtAsn. Les mesures des activités acceptrices de l’ARNt total de P. aeruginosa pour le glutamate et la glutamine ainsi que la toxicité à surproduire la GluRS chez E. coli indiquent que la GluRS est non discriminatoire (capables de glutamyler l’ARNtGlu et l’ARNtGln); cette hypothèse a été …
Colloque
L'intégron est un nouveau type d'élément mobile permettant la recombinaison spécifique de site des gènes de résistance aux antibiotiques. Celui-ci se compose de deux régions conservées entre lesquelles s'insèrent différents gènes de résistance sous forme de cassettes. L'utilisation d'oligonucléotides, spécifiques aux régions conservées de l'intégron, et d'autres techniques de biologie moléculaire a permis d'identifier de nouvelles combinaisons et même de nouveaux gènes de résistance chez diverses souches cliniques de Klebsiella pneumoniae provenant de Chine. La cartographie des patrons de résistance chez les intégrons de différents isolats cliniques s'avère être un outil précieux pour l'étude de tendances épidémiologiques de la dissémination …
Colloque
La dissémination des gènes de résistance aux antibiotiques est un problème très important de nos jours; tant du point de vue clinique que du point de vue fondamental. On connaît présentement trois mécanismes responsables de cette dissémination: les plasmides, les transposons et plus récemment, les intégrons. Les intégrons sont des éléments d'ADN mobiles constitués de deux segments conservés, les segments 5' et 3', encadrant un segment central variable. Ces éléments d'ADN sont ainsi capables d'acquérir une grande variété de gènes de résistance aux antibiotiques différents, conférant ainsi une résistance multiple à un hôte bactérien, et ce, sans l'intervention de transposons …
Colloque
Chlamydia trachomatis est reconnu comme un organisme pathogène fréquemment rencontré dans les maladies transmisses sexuellement et causant aussi des maladies oculaires chez l'homme. Cet organisme possède un plasmide omégaérites de 7.5 kilo paires de bases (kb). Un cadre de lecture (CLO), des huit trous ouverts de plasmide, pourrait correspondre à un gène codant pour une DNAse de E. coli qui joue un rôle dans la réplication. Dans notre laboratoire, nous avons démontré que ce gène, ainsi que d'autres, similaires aux ADN recombinases de la famille des intégrases, sont impliqués dans la recombinaison spécifique de site et l'intégration de ces plasmides …
Colloque
Le chargement du glutamate sur le tRNA(Glu est catalysé par la glutamyl-tRNA synthétase (GluRS), un monomère de 53.8 kilodaltons (kDa) chez E. coli (Breton et al., J. Biol. Chem. 261: 10610-10617, 1986). Des protéolyses partielles de cette enzyme ont mis en évidence l'existence de sites d'attaques préférentiels délimitant des fragments de 12.9, 2.3, 12.1 et 26.5 kDa à partir du NH2 au COOH- terminal du polypeptide. La taille de ces fragments laisse croire que celui de 23 kDa serait une structure-charnière, et que ceux de 12.9, 12.1 et 26.5 kDa seraient des domaines structuraux (ou double domaine dans le cas …
Colloque
La majorité des β-lactamases plasmidiques sont portées par des éléments transposables. On classe habituellement les β-lactamases selon leur spectre d'activité et/ou leur séquence primaire. Les séquences des gènes des β-lactamases TEM-1 et OXA-2 sont connues, mais leur homologie est tellement faible qu'on explique mieux la similarité de leurs activités respectives par une évolution convergente. Nous avons séquencé le gène de la β-lactamase OXA-1. Les séquences protéiques des β-lactamases OXA-1 et OXA-2 sont suffisamment homologues pour qu'il soit permis d'affirmer qu'elles ont évolué à partir d'un ancêtre commun. Grâce aux séquences des régions flanquantes des gènes OXA-1 et OXA-2 nous avons …
Colloque
Nous avons récemment décrit le phénomène de tolérance chez Haemophilus influenzae. Afin d'élucider le mécanisme de cette résistance, nous avons d'abord isolé les protéines de la membrane interne de deux souches d'Haemophilus influenzae de type b, l'une sensible à différentes ß-lactamines et l'autre tolérante. Nous avons identifié, chez la souche sensible, sur SDS-PAGE, une protéine de 66K qui était absente chez la tolérante. De plus, l'Haemophilus influenzae sensible présente une protéine de 68K. Ces protéines correspondent aux "Penicillin-Binding Proteins" (PBPs). L'analyse par fluorographie, des PBPs de ces deux souches révèle une forte liaison de la 68K chez la souche tolérante …
Colloque
Chaque Beta-lactamase plasmidique des bactéries à Gram négatif a un comportement enzymatique différent. Pour l'étude épidémiologique de ces gènes de résistance, nous développons des sondes d'ADN pour leur détection. Différentes sondes fragments ont déjà été construites mais nos résultats indiquent que ces sondes ne sont pas toujours spécifiques. Pour contourner ce problème, une nouvelle stratégie faisant appel à des sondes oligonucleotides a été adoptée. La Beta-lactamase OXA-2 est codée par le plasmide de résistance R167 et la séquence N-terminale de la protéine est connue. Le plasmide recombinant pIJ34 a été obtenu en clonant le gène CXX-2 dans le plasmide vecteur …
