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Colloque
Bacillus megaterium est une bactérie Gram-positive sporulée, apparentée à Bacillus subtilis. B. megaterium est une bactérie importante du point de vue biotechnologique car elle est utilisée dans la production de la vitamine B12. Les gènes hem sont responsables des premières étapes dans la synthèse de la vitamine B12, ce qui nous a déterminé à les cloner. Nous présentons ci-dessous le résultat du clonage du gène hemB de B. megaterium. En vue du clonage, l'ADN chromosomique de B. megaterium a été digéré avec différentes enzymes de restriction et hybridé (Southern) avec une sonde correspondant au gène hemB de B.subtilis qui a …
Colloque
Les ménaquinones font partie de la chaîne respiratoire des bactéries Gram+ où elles remplacent l'ubiquinone. Les premiers mutants men- de S. aureus furent obtenus par sélection avec ménoquine (Sasarman et al. 1969. Nature 224:272), mais aucun essai de clonage des gènes respectifs n'a été entrepris jusqu'à présent. Le but de notre travail a été justement de cloner les gènes men- de S. aureus. Afin de faciliter le clonage des gènes men, nous avons utilisé la mutagénèse à l'aide du transposon Tn917 (Eryr), porté par un plasmide thermosensible (pTV1). Les mutants obtenus ont été identifiés à l'aide de la ménadione, car …
Colloque
Le gène hēma code pour l'enzyme responsable de la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique qui est le premier intermédiaire de la voie de biosynthèse des porphyrines. Par hybridation avec une sonde du gène hēma d'Escherichia coli K12, nous avons identifié un fragment Hind III de 7,35 kb de Salmonella typhimurium qui porte le gène hēma. Nous avons ensuite localisé ce gène sur un fragment AvaI de 1,6 kb. Le sous-clonage de différentes portions de ce fragment dans le vecteur pKO1 nous a permis de circonscrire la région promoteur. Nous sommes en train de séquencer le fragment pour déterminer afin d'identifier plus …
Colloque
Le triméthoprime (TMP) est une diamino pyrimidine synthétique qui bloque la réduction de l'acide dihydrofolique (DHFA) en acide tétrahydrofolique (THFA). Ceci se fait au niveau de la dihydrofolate réductase (DHFRase) qui a été clonée selon un analogue structural d'une plus grande affinité pour le TMP que pour le substrat naturel : DHFA. La DHFRase joue un rôle primordial pour les déterminer radicaux mono-carbonés. L'activité au niveau du ribonucléaire naturel haut chez l'essence de la résistance au TMP apparu chez les souches d'Entérobactéries. La présence de transposons (Tn) portés par des plasmides R TMP transférables par conjugaison, est responsable de cette …
Colloque
Le gène hemA code pour l'enzyme responsable de la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique (5-ALA), le premier intermédiaire de la voie des porphyrines. Les principaux mécanismes de contrôle de cette voie s'exercent au niveau de la synthèse de 5-ALA, d'où l'intérêt pour l'étude du gène hemA. Dans le but d'élucider la régulation de la voie des porphyrines chez E. coli K12, nous avons cloné précédemment le gène hemA sur un fragment d'environ 2.5 kb. Nous présentons ici une carte physique détaillée de la région hemA de E. coli K12. Les fragments transcrits de ce gène ont été redéfinis dans un vecteur …
Colloque
Le gène hemB code pour la déshydratase de l'acide delta-aminolevulinique (EC 4.2.1.24), l'enzyme responsable de la biosynthèse du porphobilinogène. En ce qui suit nous décrivons le clonage du gène hemB de E. coli K12 à partir d'un dérivé du plasmide F13. Le clonage a été effectué par ligature d'un fragment EcoRI de 14.8 kB dans le vecteur pCR1. La présence du gène hemB sur le fragment fut attestée par la complémentation d'un mutant hemB de E. coli K12. Le mutant hemB transformé par le plasmide hybrid produisit des colonies de taille normale sur les milieux usuels et présentait une activité …
Colloque
Les porphyrines sont des constituantes de base des organismes vivants. Leurs dérivés jouent un rôle essentiel dans des processus fondamentaux tels la photosynthèse, la respiration, la synthèse des acides nucléiques, etc. La première étape dans la biosynthèse des porphyrines est la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique (5-ALA). Cette synthèse est effectuée par la 5-ALA synthase (5-ALAS) qui est codée par le gène hemA. Ainsi, le gène hemA est responsable de la synthèse du premier intermédiaire des voies métaboliques qui conduisent à la chlorophylle, l'hème, la vitamine B12 etc. Il est donc évident que les principaux mécanismes de régulations de voies respectives …
Colloque
Les porphyrines sont des constituantes de base des organismes vivants. Leurs dérivés jouent un rôle essentiel dans des processus fondamentaux tels la photosynthèse, la respiration, la synthèse des acides nucléiques, etc. La première étape dans la biosynthèse des porphyrines est la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique (5-ALA). Cette synthèse est effectuée par la 5-ALA synthase (5-ALAS) qui est codée par le gène hemA. Ainsi, le gène hemA est responsable de la synthèse du premier intermédiaire des voies métaboliques qui conduisent à la chlorophylle, l'hème, la vitamine B12 etc. Il est donc évident que les principaux mécanismes de régulations de voies respectives …
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Les porphyrines sont des constituantes de base des organismes vivants. Leurs dérivés jouent un rôle essentiel dans des processus fondamentaux tels la photosynthèse, la respiration, la synthèse des acides nucléiques, etc. La première étape dans la biosynthèse des porphyrines est la synthèse de l'acide 5-aminolévulinique (5-ALA). Cette synthèse est effectuée par la 5-ALA synthase (5-ALAS) qui est codée par le gène hemA. Ainsi, le gène hemA est responsable de la synthèse du premier intermédiaire des voies métaboliques qui conduisent à la chlorophylle, l'hème, la vitamine B12 etc. Il est donc évident que les principaux mécanismes de régulations de voies respectives …
Colloque
Certains plasmides R et Col confèrent aux souches de Escherichia coli une résistance de faible niveau à l'action bactéricide du sérum. On a émis l'hypothèse que cette résistance devrait jouer un rôle dans la capacité d'une souche de E. coli de provoquer des infections extraintestinales. Le corollaire de cette hypothèse est que ces souches devraient être isolées fréquemment des infections extraintestinales. Avant notre disposition une collection de 48 plasmides R conjugatifs provenant des souches d'Enterobacteriaceae isolées d'infections urinaires, nous avons essayé de vérifier la fréquence des plasmides porteurs du déterminant de résistance au sérum (SerRés) parmi ces plasmides, dont 30 …
