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Colloque
Le TuMV est associé à des pertes économiques importantes dans le domaine de l’agriculture. Son génome est composé d’un ARN ss de 10000 nt et de polarité positive codant pour une polyprotéine. Cette dernière conduit à la libération de neuf protéines sous l’action de protéases virales. Afin d’étudier l’implication des protéines virales, il faut générer un ADNc du génome viral. La synthèse de l’ADNc est réalisée à l’aide de la technique d’Okayama et Berg. Il s’agit de préparer un vecteur/arnc qui contient une extrémité poly-I de 40 nt. L’ARN viral étant polyadénylé en 3’ est hybridé au vecteur/arnc. On procède …
Colloque
Le VNPI possède un génome composé d'un double brin d'ARN bisegmenté: le segment A code pour une polyprotéine possédant l'arrangement NH2-VP2-VP3-VP3-COOH. Cette polyprotéine est clivée présumément par l'endoprotéase NS (Manning et al.) en deux protéines structurales majeures, VP2 et VP3. Afin de vérifier si la protéine NS est bien une protéinase et qu'elle est responsable du clivage de la polyprotéine, nous avons cloné la bande codant la région NS-VP3 du génome par la technique de RT-PCR et nous avons cloné ce cDNA dans le vecteur d'expression pET21b. Par la suite nous avons analysé le réticulocyte de lapins immunisés avec la …
Colloque
Le TuMV fait partie du plus grand groupe de virus de plante, soit les potyvirus. Ils sont associés à des pertes économiques importantes en agriculture. Le génome du TuMV est composé d'un ARN simple-brin positif de 10 kb qui est polyadénylé en 3'. Son ARN est traduit sous la forme d'une polyprotéine qui est clivée pour libérer 8 protéines. Le but de la recherche est de produire un ARN synthétique infectieux afin de vérifier l'implication de certaines protéines virales au niveau de la réplication et de la propagation. L'amplification par PCR de l'ARN du TuMV s'est faite en plusieurs étapes …
Colloque
Notre objectif est de synthétiser des anticorps du type chaîne unique (scFV) dirigé contre la capside du virus de la mosaïque du navet (TuMV) et d'exprimer ces protéines chez la plante afin d'interrompre la réplication du virus. Le scFV consiste en une chaîne polypeptidique composée de domaines variables des chaînes légères et lourdes des immunoglobulines et il reconnaît le même épitope que l'anticorps complet. La synthèse du scFV a été accomplie à partir de deux hybridomes sécrétant les anticorps monoclonaux dirigés contre la capside du TuMV. L'ARN total de ces deux lignées a été utilisé pour générer deux ADNc par …
Colloque
La présence de la coiffe est universelle chez les ARNm cellulaires eucaryotes où elle dirige l'initiation de la traduction et les seules exceptions connues sont trouvées parmi les virus à ARN. La séquence non-traduite leader 5' (SNTR) des ARNm est vraisemblablement impliquée dans le contrôle de l'initiation de la traduction coiffe-indépendante. Le TuMV est un virus à ARN positif (sans ARNm souche-complémentaire) dont la traduction est coiffe-indépendante, son extrémité 5' étant suivie par une coiffe interne. Les TuMV à coiffe interne se distinguent dans nos laboratoires. Nous avons retourné sur le site du TuMV le cycle 5' et mis en …
Colloque
Le virus de la mosaïque du navet (TuMV) infecte les plantes du genre Brassica et fait partie du groupe des potyvirus. Son génome est composé d'un ARN positif de près de 10000 nucléotides qui code pour une polyprotéine de plus de 3000 acides aminés. Afin de comprendre la biologie moléculaire de ce virus, une portion de 6 kb de l'ARN viral a été clonée et séquencée. Par la suite, différents fragments de l'ADNc du génome ont été insérés dans le vecteur pET11 pour expression dans E. coli. Des hauts niveaux d'expression des protéines virales ont été obtenus et leur activité …
Colloque
La pyruvate kinase de Halobacterium cutirubrum a été partiellement purifiée en trois étapes : préparation d'un extrait bactérien, précipitation au sulfate d'ammonium et chromatographie d'hydrophobicité. La croissance bactérienne se fait même complète à 37°C sous aération et en agitation vigoureuses. Les cellules récoltées avant d'atteindre la phase stationnaire sont brisées à l'alumine. Le test d'activité de la pyruvate kinase, un test spectrophotométrique couplé avec la lactate déshydrogénase, a été mis au point après étude de l'effet de la concentration en sel et de la stabilité en fonction du pH et de la concentration en sel a aussi été menée avant …
