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Colloque
La 17b-Hydroxystéroïd déshydrogénase1 (17b-HSD1) intervient dans la formation des hormones stéroïd actives qui stimulent les cancers hormono-dépendants. La 17b-HSD1 a subi une protéolyse par la subtilisine. La réaction à été faite à un pH de 7.5, 37°C. La masse de chacun des polypeptides obtenus a été déterminée par l'électrophorèse de gel de polyacrylamide en présence de SDS. Un polypeptide de 32 kDa a été obtenu par chromatographie l'intéraction hydrophobique. L'analyse de la séquence du côté N-terminale nous a indiqué que les cinq premiers acide aminés en N-terminale de la 17b-HSD ayant subi la protéolyse sont identiques que celui la de …
Colloque
La 17b-hydroxysteroïd déshydrogenase estrogenique (17b-HSD1) est résponsable de la formation d'estradiol, l'estrogène le plus active. La technique de dialyse à l'équilibre a été utilisée pour étudier l'interaction entre la protéine et le ligand. La liaison des substrats, des cofacteurs et des inhibiteurs avec la 17b-HSD1 a été étudiée par cette technique. Les données ont été analysées par graphique de Scatchard. Les KD de NAD et de NADP étaient respectivement de 73.7 mM et de 0.4 mM. Les résultats ont montré que la 17b-HSD1 a environ 185 fois plus d'affinité pour le NADP que pour le NAD. Les KDs pour les …
Colloque
La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase joue un rôle essentiel dans la synthèse d'œstrogènes. Elle possède une structure dimérique, formée de deux chaînes polypeptides identiques dont la formule est α2. La cinétique à l'état stationnaire de la 17β-HSD est étudiée pour différentes méthodes. Cela a mis en évidence pour la première fois, deux sites distincts de cette enzyme pour la liaison du substrat. Les valeurs de ces deux sites varient plus que 10 fois tandis que les valeurs de Vmax restent constantes. La 17β-HSD se comporte normalement avec un comportement non conforme à la fonction de Michaelis. Les données cinétiques traitées par la …
Colloque
La 17B-hydroxystéroïde déshydrogénase (17B-HSD) est responsable de la conversion des stéroïdes surrénaliens en androgène et estrogène qui stimulent le cancer de la prostate et le cancer du sein. Les formes apoenzyme et holoenzyme (complexe avec le NADP+) de la 17B-HSD de placenta humain sont préparées à l'aide d'une chromatographie d'affinité en utilisant différentes conditions d'élution avec la technique de FPLC. L'apoenzyme est obtenue en éluent avec le NAD+ et une colonne de "bleu-Sepharose". Le NAD+ est ensuite séparé sur une colonne à interaction hydrophobique ("phenyl-Sepharose") ou sur une colonne à échangeuse d'anions ("Mono Q"). L'holoenzyme est préparée en éluent avec …
Colloque
La 17B-hydroxystéroïde déshydrogénase (17B-HSD) est responsable de la conversion des stéroïdes surrénaliens en androgène et estrogène qui stimulent le cancer de la prostate et le cancer du sein. Les formes apoenzyme et holoenzyme (complexe avec le NADP+) de la 17B-HSD de placenta humain sont préparées à l'aide d'une chromatographie d'affinité en utilisant différentes conditions d'élution avec la technique de FPLC. L'apoenzyme est obtenue en éluent avec le NAD+ et une colonne de "bleu-Sepharose". Le NAD+ est ensuite séparé sur une colonne à interaction hydrophobique ("phenyl-Sepharose") ou sur une colonne à échangeuse d'anions ("Mono Q"). L'holoenzyme est préparée en éluent avec …
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La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) de placenta humain est responsable de la conversion des œstrogènes qui stimulent le cancer du sein. L'apoenzyme a une absorption maximale à 279 nm et un rapport d'absorption à 280 et 260 nm de 1.65±0.1. Le complexe enzyme-NADP+ a un large pic d'absorption situé entre 268 à 278 nm et un rapport d'absorption à 280 nm et 260 nm de 1.1±0.05. En additionnant le substrat estradiol au complexe enzyme-NADP+, l'absorption s'accroit à 340 nm et une émission de fluorescence se produit à 450 nm suite à la formation du NADPH. Aucun changement significatif pour ces propriétés …
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La 17B-hydroxystéroïde déshydrogénase (17B-HSD) est responsable de la conversion des stéroïdes surrénaliens en androgène et estrogène qui stimulent le cancer de la prostate et le cancer du sein. Les formes apoenzyme et holoenzyme (complexe avec le NADP+) de la 17B-HSD de placenta humain sont préparées à l'aide d'une chromatographie d'affinité en utilisant différentes conditions d'élution avec la technique de FPLC. L'apoenzyme est obtenue en éluent avec le NAD+ et une colonne de "bleu-Sepharose". Le NAD+ est ensuite séparé sur une colonne à interaction hydrophobique ("phenyl-Sepharose") ou sur une colonne à échangeuse d'anions ("Mono Q"). L'holoenzyme est préparée en éluent avec …
Colloque
La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) est responsable de la conversion des stéroïdes surrénaliens en androgènes et estrogènes qui stimulent le cancer de la prostate et le cancer du sein. La compréhension des mécanismes de catalyse et de régulation ainsi que le rôle de la 17β-HSD dans le métabolisme hormonal est crucial pour au blocage de cette enzyme. L'enzyme (placenta humain) est rapidement purifiée à homogénéité en utilisant les techniques de PFLC. Les poids moléculaires apparents de cette enzyme dénaturée et native sont respectivement de 34 KDa mesuré par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) en présence de SDS et de 68 …
Colloque
La mesure de cinétique à l’état stationnaire de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) par méthode TLC en séparant estradiol et estrone ou par surveillance de NADH Fluorescence a produit des résultats de haute sensibilité. Ce qui démontre, pour la première fois, deux sites distincts de cette enzyme pour le substrat estradiol ou le co-facteur NAD+. Dans chaque cas, 17β-HSD possède deux Km avec plus de 10 fois de différence dans leur valeur tandis que celle de deux Kcat ne diffèrent que de 2 ou 3 fois. Ce comportement asymétrique coïncide avec notre résultat sur la liaison de substrats et cofacteur par …
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La mesure de cinétique à l’état stationnaire de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) par méthode TLC en séparant estradiol et estrone ou par surveillance de NADH Fluorescence a produit des résultats de haute sensibilité. Ce qui démontre, pour la première fois, deux sites distincts de cette enzyme pour le substrat estradiol ou le co-facteur NAD+. Dans chaque cas, 17β-HSD possède deux Km avec plus de 10 fois de différence dans leur valeur tandis que celle de deux Kcat ne diffèrent que de 2 ou 3 fois. Ce comportement asymétrique coïncide avec notre résultat sur la liaison de substrats et cofacteur par …
